納豆激酶活性測(cè)定.docx

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1、納豆激酶檢測(cè)方法目前行業(yè)內(nèi)流行的納豆激酶檢測(cè)大致有三種方法，其原理、利弊簡(jiǎn)介如下：一、???IU纖維蛋白平板法：以尿激酶為對(duì)照，與納豆激酶樣品同時(shí)在纖維蛋白平板特定條件下所形成水解圈，測(cè)量各自水解圈直徑，通過(guò)計(jì)算取得相應(yīng)納豆激酶活力。由于對(duì)水解圈直徑的認(rèn)定的認(rèn)定存在經(jīng)驗(yàn)人員視覺(jué)差異，導(dǎo)致測(cè)定粗放，數(shù)據(jù)波動(dòng)性強(qiáng)，重復(fù)性差，不具權(quán)威依據(jù)。二、???FU紫外分光法：納豆激酶與纖維蛋白在一定條件下作用會(huì)產(chǎn)生可溶性低分子物質(zhì)，通過(guò)紫外分光技術(shù)檢測(cè)其濃度，通過(guò)計(jì)算取得相應(yīng)納豆激酶活力，數(shù)據(jù)穩(wěn)定，重復(fù)性強(qiáng)。測(cè)定硬件條件苛刻，測(cè)定成本高，不具權(quán)

2、威性依據(jù)。三、???U中性蛋白酶法：納豆激酶與酪蛋白在一定條件下作用會(huì)產(chǎn)生可溶性低分子物質(zhì)，通過(guò)普通比色計(jì)檢測(cè)其濃度，計(jì)算取得相應(yīng)納豆激酶活力，數(shù)據(jù)穩(wěn)定，重復(fù)性強(qiáng)。測(cè)定簡(jiǎn)單，檢測(cè)成本低，有國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)為依據(jù)。1）瓊脂糖一纖維蛋白平板法是，是目前最常用的纖溶酶溶栓活力測(cè)定方法，此法的原理是用瓊脂糖作為固體支持，以凝血酶和纖維蛋白原制做人工血栓平板，注入NK，用溶解圈垂直直徑的乘積(mm2)表示纖溶活力，以標(biāo)準(zhǔn)UK或纖溶酶為標(biāo)準(zhǔn)品作標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算出NK的活性相當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn)品的單位數(shù)。此法簡(jiǎn)便易行，并可同時(shí)測(cè)定多個(gè)樣品，但由于溶解圈面積受恒溫

3、反應(yīng)時(shí)間的影響很大，所以對(duì)恒溫時(shí)間的控制十分重要，且恒溫時(shí)間對(duì)粗制酶活性測(cè)定的影響比對(duì)NK精制產(chǎn)品活性測(cè)定的影響大。2）在直徑15mm的硅化試管中依次加入pH值為7.7的咪唑緩沖液、納豆激酶收集液、凝血酶和纖維蛋白原，立即振搖數(shù)秒，使之產(chǎn)生絮狀物，置38℃水浴30min，置冰水中終止反應(yīng)。用100目尼龍網(wǎng)過(guò)濾試管中未溶解的纖維蛋白，濾紙吸干，用蒸餾水漂洗，再用濾紙吸干，放入小試管中，再加3mL濃度為O．2mol/L的NaOH溶液，在沸水中煮15min，冷卻。用分光光度計(jì)測(cè)定溶液在280nm處的吸光值，并根據(jù)活力計(jì)算公式計(jì)算纖溶活

4、力。納豆激酶活力=A對(duì)照-A樣0.5ml×30min×3×1000ug