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1、物流開題報告畢業(yè)論文研究背景眼科最常見致盲眼病有白內(nèi)障、青光眼、糖尿病視網(wǎng)膜病變和黃斑病等，其中青光眼是繼白內(nèi)障后的第二致盲原因，物流開題報告畢業(yè)論文。我國青光眼的發(fā)病率為0.52%，患病人數(shù)約為700萬。20**年資料顯示世界青光眼發(fā)病人數(shù)到20**年將達到7000萬，雙眼盲目人數(shù)達到840萬。眾多的青光眼患者和青光眼盲者，不僅給患者帶來極大的身心痛苦，而且還造成社會和經(jīng)濟的巨大負擔，因此，預(yù)防、控制及治療青光眼十分重要且迫切！青光眼是一種由于病理性眼壓增高導(dǎo)致的具有特征性視神經(jīng)結(jié)構(gòu)損傷和視野缺損為表現(xiàn)的神
2、經(jīng)性退行性視神經(jīng)病變，其最終的結(jié)局是視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞凋亡、視功能逐漸喪失。目前已有大量保護RGCs的研究結(jié)果，主要包括：改善視乳頭微循環(huán)、谷氨酸途徑抑制劑、神經(jīng)營養(yǎng)因子，誘導(dǎo)熱休克蛋白表達及抗氧化治療等。然而，青光眼的發(fā)病機制至今尚未完全闡明。信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、受體通道研究在RGCs損傷與保護中的作用近年來正得到關(guān)注。最新的研究方向和靶點之一是關(guān)于能感受壓力的受體通道可能參與傳遞病理刺激造成神經(jīng)損傷。TRPC6是一個新發(fā)現(xiàn)的、壓力敏感、參與神經(jīng)元存活與凋亡的鈣離子通透膜通道蛋白。本人曾參與課題TRPC6通道在視網(wǎng)膜缺
3、血再灌模型中對視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)的保護作用的研究，并獲得了有價值的前期研究結(jié)果：第5頁較為全面而精確的定位了TRPC6通道基因和蛋白在SD大鼠視網(wǎng)膜、尤其是RGCs上的表達和分布，TRPC6在RGC層上有選擇性的高表達；探討了TRPC6在大鼠視網(wǎng)膜缺血再灌損傷過程中的表達變化，TRPC6基因和蛋白在視網(wǎng)膜缺血損傷中的再灌注后24小時，出現(xiàn)一過性的表達升高；在體的藥理學(xué)實驗結(jié)果顯示，其激動劑OAG具有保護視網(wǎng)膜IR模型誘導(dǎo)的RGCs免受損傷，而拮抗劑SKF96365則促進了RGCs凋亡的發(fā)生，本研究擬進一步探討TRP
4、C6的作用機制。研究發(fā)現(xiàn)，腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子與TRPC通道在信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、調(diào)控細胞存活的過程中有密切的聯(lián)系。20**年4月中國科學(xué)院上海神經(jīng)科學(xué)研究所王以政研究員課題組在NatureNeurosiene上發(fā)表論文，首次證實過表達TRPC6TRPC3可保護小腦神經(jīng)元對抗因血清剝奪而導(dǎo)致的細胞死亡，且發(fā)現(xiàn)BDNF位于TRPC36介導(dǎo)的細胞保護信號通路的上游。本課題擬探討B(tài)DNF介導(dǎo)TRPC6通道蛋白保護視網(wǎng)膜跟模型誘導(dǎo)的RGCs免受損傷的作用機制，對深入闡明青光眼的發(fā)病機制，為臨床干預(yù)治提供新的思路和藥物干預(yù)靶點，具
5、有一定的現(xiàn)實意義。本課題的研究主要分為以下二部分：第一部分視網(wǎng)膜IR模型中調(diào)控TRPC通道時BDNF的表達變化一、研究目的在SD大鼠視網(wǎng)膜IR模型中檢測bdnf基因不同再灌注時間點的表達變化，同時檢測抑制TRPC通道時BDNF蛋白水平變化、探討其表達類型對RGCs凋亡的影響。二、研究方法1、在視網(wǎng)膜IR模型中檢測bdnf基因的表達。采用視神經(jīng)血管鉗夾法建立視網(wǎng)膜IR模型，夾閉視網(wǎng)膜血供60分鐘，分別于再灌注后3小時、24小時、48小時、7天處死大鼠，摘取眼球，顯微鏡下剝離視網(wǎng)膜，提取視網(wǎng)膜總RNA，利用反轉(zhuǎn)錄
6、多聚酶鏈反應(yīng)及實時熒光定量PCR測定bdnf基因表達變化。第5頁2、抑制TRPC通道時檢測BDNF蛋白的表達。建立大鼠視網(wǎng)膜IR模型，于視網(wǎng)膜缺血術(shù)前30分鐘，右眼通過玻璃體腔注射TRPC拮抗劑SKF96365為實驗組，左眼注射溶劑PBS為陰性對照組，分別于再灌后3小時、6小時、12小時、24小時、48小時、72小時處死大鼠，摘取眼球，顯微鏡下剝離視網(wǎng)膜，提取視網(wǎng)膜總蛋白，蛋白質(zhì)免疫印跡檢測BDNF在視網(wǎng)膜組織中的蛋白表達水平，開題報告《物流開題報告畢業(yè)論文》。3、抑制TRPC通道時檢測bdnf基因的表達。將
7、SD大鼠分為4組，分別進行如下處理：第一組，對眼球進行假手術(shù)，只行視神經(jīng)分離術(shù)，不行視網(wǎng)膜缺血手術(shù)；第二組，建立視網(wǎng)膜IR模型；第三組于視網(wǎng)膜缺血術(shù)前30分鐘，通過玻璃體腔注射PBS溶液，然后再建立視網(wǎng)膜IR模型；第四組于視網(wǎng)膜缺血術(shù)前30分鐘，通過玻璃體腔注射注射SKF96365，然后再建立視網(wǎng)膜IR模型。所有大鼠于再灌注后24小時處死，摘取眼球，顯微鏡下剝離視網(wǎng)膜，提取視網(wǎng)膜總RNA，Real-timePCR測定bdnf基因表達變化。三、研究結(jié)果RT-PCR及Real-timePCR結(jié)果顯示bdnfmRN
8、A在再灌注后3小時開始出現(xiàn)升高，24小時出現(xiàn)表達高峰，是對照組的1.4倍；Westernblot結(jié)果顯示應(yīng)用SKF96365抑制TRPC通道后，BDNF的前體蛋白表達量升高，并于再灌注后24小時達到高峰，是對照組的1.4倍，而成熟型BDNF在整個再灌注過程中未見明顯變化。缺血再灌注24小時，IR+SKF96365組bdnf的基因表達水平分別是假手術(shù)組、IR組、IR+PBS組的第5頁7、1.7、1.4
