物流開(kāi)題報(bào)告畢業(yè)論文

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1、物流開(kāi)題報(bào)告畢業(yè)論文研究背景眼科最常見(jiàn)致盲眼病有白內(nèi)障、青光眼、糖尿病視網(wǎng)膜病變和黃斑病等，其中青光眼是繼白內(nèi)障后的第二致盲原因，物流開(kāi)題報(bào)告畢業(yè)論文。我國(guó)青光眼的發(fā)病率為0.52%，患病人數(shù)約為700萬(wàn)。20**年資料顯示世界青光眼發(fā)病人數(shù)到20**年將達(dá)到7000萬(wàn)，雙眼盲目人數(shù)達(dá)到840萬(wàn)。眾多的青光眼患者和青光眼盲者，不僅給患者帶來(lái)極大的身心痛苦，而且還造成社會(huì)和經(jīng)濟(jì)的巨大負(fù)擔(dān)，因此，預(yù)防、控制及治療青光眼十分重要且迫切！青光眼是一種由于病理性眼壓增高導(dǎo)致的具有特征性視神經(jīng)結(jié)構(gòu)損傷和視野缺損為表現(xiàn)的神

2、經(jīng)性退行性視神經(jīng)病變，其最終的結(jié)局是視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞凋亡、視功能逐漸喪失。目前已有大量保護(hù)RGCs的研究結(jié)果，主要包括：改善視乳頭微循環(huán)、谷氨酸途徑抑制劑、神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子，誘導(dǎo)熱休克蛋白表達(dá)及抗氧化治療等。然而，青光眼的發(fā)病機(jī)制至今尚未完全闡明。信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、受體通道研究在RGCs損傷與保護(hù)中的作用近年來(lái)正得到關(guān)注。最新的研究方向和靶點(diǎn)之一是關(guān)于能感受壓力的受體通道可能參與傳遞病理刺激造成神經(jīng)損傷。TRPC6是一個(gè)新發(fā)現(xiàn)的、壓力敏感、參與神經(jīng)元存活與凋亡的鈣離子通透膜通道蛋白。本人曾參與課題TRPC6通道在視網(wǎng)膜缺

3、血再灌模型中對(duì)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)的保護(hù)作用的研究，并獲得了有價(jià)值的前期研究結(jié)果：第5頁(yè)較為全面而精確的定位了TRPC6通道基因和蛋白在SD大鼠視網(wǎng)膜、尤其是RGCs上的表達(dá)和分布，TRPC6在RGC層上有選擇性的高表達(dá)；探討了TRPC6在大鼠視網(wǎng)膜缺血再灌損傷過(guò)程中的表達(dá)變化，TRPC6基因和蛋白在視網(wǎng)膜缺血損傷中的再灌注后24小時(shí)，出現(xiàn)一過(guò)性的表達(dá)升高；在體的藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，其激動(dòng)劑OAG具有保護(hù)視網(wǎng)膜IR模型誘導(dǎo)的RGCs免受損傷，而拮抗劑SKF96365則促進(jìn)了RGCs凋亡的發(fā)生，本研究擬進(jìn)一步探討TRP

4、C6的作用機(jī)制。研究發(fā)現(xiàn)，腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子與TRPC通道在信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、調(diào)控細(xì)胞存活的過(guò)程中有密切的聯(lián)系。20**年4月中國(guó)科學(xué)院上海神經(jīng)科學(xué)研究所王以政研究員課題組在NatureNeurosiene上發(fā)表論文，首次證實(shí)過(guò)表達(dá)TRPC6TRPC3可保護(hù)小腦神經(jīng)元對(duì)抗因血清剝奪而導(dǎo)致的細(xì)胞死亡，且發(fā)現(xiàn)BDNF位于TRPC36介導(dǎo)的細(xì)胞保護(hù)信號(hào)通路的上游。本課題擬探討B(tài)DNF介導(dǎo)TRPC6通道蛋白保護(hù)視網(wǎng)膜跟模型誘導(dǎo)的RGCs免受損傷的作用機(jī)制，對(duì)深入闡明青光眼的發(fā)病機(jī)制，為臨床干預(yù)治提供新的思路和藥物干預(yù)靶點(diǎn)，具

5、有一定的現(xiàn)實(shí)意義。本課題的研究主要分為以下二部分：第一部分視網(wǎng)膜IR模型中調(diào)控TRPC通道時(shí)BDNF的表達(dá)變化一、研究目的在SD大鼠視網(wǎng)膜IR模型中檢測(cè)bdnf基因不同再灌注時(shí)間點(diǎn)的表達(dá)變化，同時(shí)檢測(cè)抑制TRPC通道時(shí)BDNF蛋白水平變化、探討其表達(dá)類型對(duì)RGCs凋亡的影響。二、研究方法1、在視網(wǎng)膜IR模型中檢測(cè)bdnf基因的表達(dá)。采用視神經(jīng)血管鉗夾法建立視網(wǎng)膜IR模型，夾閉視網(wǎng)膜血供60分鐘，分別于再灌注后3小時(shí)、24小時(shí)、48小時(shí)、7天處死大鼠，摘取眼球，顯微鏡下剝離視網(wǎng)膜，提取視網(wǎng)膜總RNA，利用反轉(zhuǎn)錄

6、多聚酶鏈反應(yīng)及實(shí)時(shí)熒光定量PCR測(cè)定bdnf基因表達(dá)變化。第5頁(yè)2、抑制TRPC通道時(shí)檢測(cè)BDNF蛋白的表達(dá)。建立大鼠視網(wǎng)膜IR模型，于視網(wǎng)膜缺血術(shù)前30分鐘，右眼通過(guò)玻璃體腔注射TRPC拮抗劑SKF96365為實(shí)驗(yàn)組，左眼注射溶劑PBS為陰性對(duì)照組，分別于再灌后3小時(shí)、6小時(shí)、12小時(shí)、24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)處死大鼠，摘取眼球，顯微鏡下剝離視網(wǎng)膜，提取視網(wǎng)膜總蛋白，蛋白質(zhì)免疫印跡檢測(cè)BDNF在視網(wǎng)膜組織中的蛋白表達(dá)水平，開(kāi)題報(bào)告《物流開(kāi)題報(bào)告畢業(yè)論文》。3、抑制TRPC通道時(shí)檢測(cè)bdnf基因的表達(dá)。將

7、SD大鼠分為4組，分別進(jìn)行如下處理：第一組，對(duì)眼球進(jìn)行假手術(shù)，只行視神經(jīng)分離術(shù)，不行視網(wǎng)膜缺血手術(shù)；第二組，建立視網(wǎng)膜IR模型；第三組于視網(wǎng)膜缺血術(shù)前30分鐘，通過(guò)玻璃體腔注射PBS溶液，然后再建立視網(wǎng)膜IR模型；第四組于視網(wǎng)膜缺血術(shù)前30分鐘，通過(guò)玻璃體腔注射注射SKF96365，然后再建立視網(wǎng)膜IR模型。所有大鼠于再灌注后24小時(shí)處死，摘取眼球，顯微鏡下剝離視網(wǎng)膜，提取視網(wǎng)膜總RNA，Real-timePCR測(cè)定bdnf基因表達(dá)變化。三、研究結(jié)果RT-PCR及Real-timePCR結(jié)果顯示bdnfmRN

8、A在再灌注后3小時(shí)開(kāi)始出現(xiàn)升高，24小時(shí)出現(xiàn)表達(dá)高峰，是對(duì)照組的1.4倍；Westernblot結(jié)果顯示應(yīng)用SKF96365抑制TRPC通道后，BDNF的前體蛋白表達(dá)量升高，并于再灌注后24小時(shí)達(dá)到高峰，是對(duì)照組的1.4倍，而成熟型BDNF在整個(gè)再灌注過(guò)程中未見(jiàn)明顯變化。缺血再灌注24小時(shí)，IR+SKF96365組bdnf的基因表達(dá)水平分別是假手術(shù)組、IR組、IR+PBS組的第5頁(yè)7、1.7、1.4