轉(zhuǎn)氨酶、硝態(tài)氮、銨態(tài)氮等測定方法

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1、六、氮含量（硝酸鹽、亞硝酸鹽、游離氨基酸、銨態(tài)氮等）的測定：（2g）樣品提取液的提取:稱取新鮮植物組織2g，加入15ml無離子水研磨成勻漿，置于45℃振蕩機(jī)中搖動浸提（或超聲波）lh后用5ml無離子水沖洗干凈，然后離心或過濾(如含色素需用活性炭脫色)，濾液備用。備注（lg的經(jīng)驗）：可溶性糖、可溶性蛋白質(zhì)、VC等需要研磨提取的簡單指標(biāo)也可以使用此提取液按比例測定。?1硝態(tài)氮的測定：標(biāo)準(zhǔn)氮試劑：精稱KNO30.9021g，溶于少量重蒸無離子水中，并定容至250ml，含N量為500μgNO3一N／ml。5％水楊酸一硫酸溶液：稱取水楊酸

2、5g，溶于100ml濃H2SO4(比重1．84)中，攪拌溶解后貯于棕色瓶內(nèi)，冰箱中至多保存l周，最好現(xiàn)用現(xiàn)配。?2mol／LNaOH溶液：稱取NaOH80g放入500ml硬質(zhì)燒杯中，加入重蒸無離子水200ml，溶解后定容至l000ml。操作方法標(biāo)準(zhǔn)曲線制作?。?0ml容量瓶6只(編號)，依次加入標(biāo)準(zhǔn)氮試劑5、l0、l5、20、25、30ml，用無離子水定容，則成為50、100、l50、200、250、300ug／ml的氮系列標(biāo)準(zhǔn)溶液；再取干沽50ml三角瓶7只，分別裝入上述系列溶液0．2ml，剩下的1只三角瓶加入無離水0.2ml

3、(作為O點)；然后分別加入5％水楊酸一硫酸溶液0.8ml，混勻靜置20--30min(顯色)；最后加入2mol／LNaOH溶液l9ml，混勻。冷卻后利用751分光光度計，于410nm下比色，記錄光密度(OD)值；并以O(shè)D值為縱座標(biāo)，以標(biāo)準(zhǔn)氮(0、50、l00、150、200、250、300ug)為橫座標(biāo)，繪制一條標(biāo)準(zhǔn)曲線(通過原點的直線)。0.1ml濾液＋0.4ml5％水楊酸一硫酸溶液，混勻靜置20--30min(顯色)；最后加入2mol／LNaOH溶液9.5ml，混勻。冷卻后利用751分光光度計，于410nm下比色，記錄光密度

4、(OD)值；結(jié)果計算按照公式A=CV1/(WV2)計算。式中：A—NO3一N含量(ug／g)；W一樣品重(g)；V1一樣品提取液總量(m1)：V2一樣品反應(yīng)液數(shù)量(m1)；C一樣品在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得的N量(ug)：2亞硝態(tài)氮的測定：NaN02標(biāo)準(zhǔn)溶液：精稱分析純NaNO20.24643g，以無離子水溶解并定容至50ml,再吸取此溶液5ml定容至l000ml，作為母液，其濃度為5μgNO2一N／ml?；前吩噭悍Q取分析純磺胺(或?qū)Π被交撬?l0g，加濃HCI250ml(需用水浴加熱溶解)，用無離子水定容至lL。ɑ一萘胺試劑：稱取分

5、析純ɑ一萘胺2g，加濃HCI250ml，溶解后定容至1L。操作方法標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：取干沽試管6支(0～5號)，依次加入標(biāo)準(zhǔn)NaNO2母液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml，再依次加入無離子水1.0、0.8、0.6、0.4、0.2、0ml：搖勻后再在各管分別加入磺胺試劑和ɑ一萘胺試劑各2ml：搖勻后于35"(2水浴中顯色30min，于520ml處比色，繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線。lml樣品提取液＋2ml磺胺試劑＋2mlɑ一萘胺試劑，搖勻后于35℃水浴中顯色30min，于520ml處比色。結(jié)果計算按照公式A=CV/W計算。式中：A—N

6、02一N含量(μg/g)：C一查標(biāo)準(zhǔn)曲線值(μg)；v一樣品提取液總量(ml)；W一樣品重(g)?3游離氨基酸態(tài)氮的測定：試劑：（1）乙酸-乙酸鈉緩沖液（pH5.4）：稱取乙酸鈉54.4g放入100ml燒杯，加無氨蒸餾水到60ml刻度，水浴鍋加熱攪拌溶解。冷卻后轉(zhuǎn)入100ml容量瓶中加30ml冰醋酸，再用無氨蒸餾水稀釋至100ml。（2）水合茚三酮試劑：稱取3.0g再結(jié)晶的茚三酮置燒杯中，加入75ml正丙醇，攪拌使其溶解。再加入150ml正丁醇及300ml乙二醇，最后加入45mlpH5.4的乙酸-乙酸鈉緩沖液，混勻，貯于棕色瓶，

7、置4℃下保存?zhèn)溆茫?0天內(nèi)有效。（3）標(biāo)準(zhǔn)氨基酸：稱取80℃下烘干的亮氨酸46.8mg，溶于少量10%異丙醇中，用10%異丙醇定容至100ml。取此液5ml，用蒸餾水稀釋至50ml，即為含5μg/ml氨基氮的標(biāo)準(zhǔn)液。（4）0.1%抗壞血酸：稱取50mg抗壞血酸，溶于50ml無氨蒸餾水中，隨配隨用。（5）10%乙酸。樣品制備取新鮮植物樣品，洗凈，擦干并剪碎?；靹蚝螅杆俜Q取0.5-1.0g，于研缽中加入5ml10%乙酸，研磨勻漿后，用蒸餾水稀釋至100ml?；靹颍⒂脼V紙過濾到三角瓶中備用。制作標(biāo)準(zhǔn)曲線取6支20ml刻度試管，按表

8、操作加完試劑后混勻，蓋上大小合適的玻璃球，置沸水中加熱15min，取出后用冷水迅速冷卻并不時搖動，使加熱時形成的紅色被空氣逐漸氧化而退去，進(jìn)而呈藍(lán)紫色時，加60%乙醇4.9ml?；靹蚝笥?cm光徑比色皿在570nm波長下測定吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。樣品測定吸取樣品