正確制作使用豬自家疫苗技術

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1、正確制作使用豬自家疫苗技術內(nèi)容簡介：當前某些疾病的暴發(fā)使得國內(nèi)市場上還沒有針對該疾病的確切免疫保護效果的商品疫苗供應，因此為了挽救不可估量的經(jīng)濟損失，有的豬場使用自制自家疫苗免疫。????近年來隨著我國生豬養(yǎng)殖規(guī)模和養(yǎng)殖數(shù)量的增加，引進的外來品種越來越多，市場的流動性增大，各養(yǎng)殖豬場在消毒、防疫、治療措施等方面也存在很多空白的地方，造成現(xiàn)在各種豬病的廣泛發(fā)生和傳播，也使得當前豬病的特點呈現(xiàn)多樣化和復雜化。當前某些疾病的暴發(fā)使得國內(nèi)市場上還沒有針對該疾病的確切免疫保護效果的商品疫苗供應，因此為了挽救不可估量的經(jīng)濟損失，有的豬場使用自制自家疫苗免

2、疫。盡管有關專家呼吁不能長期或隨意使用自家疫苗，但自制自家疫苗還是經(jīng)常被用來在特定時期救急，提醒廣大養(yǎng)殖朋友對于自家苗一定要正確制作、謹慎使用。　　1、材料與方法1.1.儀器設備：37℃恒溫培養(yǎng)箱、潔凈組織攪碎機、解剖刀、電子天平、燒杯、絞肉機、不銹鋼圓盤、量筒、玻璃棒、漏斗、滅菌紗布、100毫升滅菌疫苗瓶、干熱高溫滅菌箱、無菌操作臺、酒精燈、滅菌平皿、EP管架、移液器及其滅菌槍頭、鑷子、接種環(huán)、搖菌床、瓶蓋封口機、滅菌移液管(10毫升)、250毫升細胞瓶、酸缸、吸耳球、C02培養(yǎng)箱、倒置顯微鏡、4℃冰箱、-20℃冰箱、-80℃冰箱、勻漿機等

3、?！　?.2材料試劑生理鹽水、蒸餾水、甲醛溶液、癥狀典型的病料、TSA、TSB、DMEM(營養(yǎng)液含10%小牛血清和氨基葡萄糖、維持液含2%小牛血清)、PK-1.5細胞、雙抗(青、鏈霉素)、胰蛋白酶等。　　1.3自家苗制作　　1.3.1自家組織苗制作選取患有典型癥狀且沒有用抗生素治療的病豬，用解剖刀宰殺放血，剖開胸腹部，選取肺臟、脾臟、淋巴結(主要是腹股溝淋巴結和腸系膜淋巴結)等器官作為主要病料，如果肝臟和腎臟病變較明顯，也可選取病變明顯部位作為輔助材料，但要盡量保證病料的新鮮，防止其他雜菌污染，以確保組織苗的效果。如果不能及時處理病料，則需要

4、把病料密封好放在-80℃低溫處保存。將選取的病料放在已滅菌的絞肉機中絞2～3次，試估計其重量。取相當于病料重量25%～35%的生理鹽水加入病料中混勻，放人組織搗碎機中搗碎.12000轉/分鐘搗碎約2—3分鐘，將搗碎的病料放入不銹鋼圓盤中密封，最后放人冰箱中冷凍，完全凍結的病料取出后溶解，如此反復凍融三遍，再將解凍的病料與生理鹽水按1千克：3500—4000毫升的比例進行稀釋調(diào)兌，之后用雙層無菌醫(yī)用紗布過濾，然后將過了兩層紗布的濾液再過兩次四層紗布，最后所得濾液中加入0.8%的甲醛，一小時搖勻后，置37℃恒溫箱中滅活，滅活時間不能太短。滅活期間

5、，每4～6小時搖動一次約半小時，48小時后滅活完畢，分裝前按1500國際單位/毫升比例加入雙抗(青霉素和鏈霉素)，另外還可加入一定量的黃芪多糖并搖勻，以增加豬只抗體的生成，再移至無菌操作臺中無菌分裝于100毫升疫苗瓶中，封口后置于40℃~8℃下保存待用?！　?.3.2自家細菌苗制作　　取本場患有典型癥狀且未用抗生素治療過的病豬，放血解剖，取豬體肺臟、脾臟、豬腦積液或患有關節(jié)炎的豬腿關節(jié)液于無菌操作臺上接TSA平板。若無備用TSA固體平板，先密封病料于-20℃低溫保存，并立即以蒸餾水和TSA粉末按24：1的比例調(diào)配TSA溶液并于114℃下滅菌1

6、6分鐘，之后在水浴鍋內(nèi)冷卻至45℃左右時于無菌操作臺上加入5%的無支原體小牛血清和0.15%的NAD并搖勻，同時倒制無菌TSA平板冷凝待用。接菌的平板于37℃恒溫培養(yǎng)箱下保持生長約18小時左右直至菌落形成，觀察菌落形態(tài)并進行細菌純化、生化鑒定和革蘭氏染色。據(jù)統(tǒng)計，當前臨床豬細菌病當中主要以副豬嗜血桿菌、鏈球菌、巴氏桿菌、波氏桿菌、胸膜肺炎放線桿菌、大腸桿菌等的原發(fā)或繼發(fā)感染為主。TSA固體平板上鑒定純化的細菌用TSB液體培養(yǎng)基洗下作菌液并轉于500毫升葡萄糖瓶內(nèi)的300毫升TSA液體培養(yǎng)基內(nèi)37℃搖菌擴大培養(yǎng)約18小時，其中TSB液體培養(yǎng)基以

7、蒸餾水和TSB粉末按33：.1的比例調(diào)配并于114℃滅菌16分鐘，冷卻后再加入1.2‰的NAD。擴大培養(yǎng)的細菌再以0.8%甲醛于37℃下?lián)u床搖菌滅活20小時左右，滅活的細菌再接TSA平板37℃恒溫培養(yǎng)18小時左右，根據(jù)平板上的細菌生長情況判斷細菌甲醛滅活是否徹底。同時進行細菌計數(shù)和細菌濃縮，以判斷抗原量和提高抗原量，若抗原量過大，可用滅菌生理鹽水稀釋。當驗證已滅活徹底且抗原量達標的細菌方可于無菌操作臺內(nèi)無菌分裝于100毫升疫苗瓶中，封口后置于4℃~8℃下保存待用。　　1.3.3自家病毒苗制作　　用于病毒分離的細胞主要是豬源豬腎細胞系，如PK-

8、15細胞，它可用于分離豬瘟病毒、豬藍耳病毒、豬圓環(huán)病毒、豬細小病毒、豬輪狀病毒和豬冠狀病毒等等。經(jīng)酸缸處理并用清水洗凈的細胞瓶干熱高溫滅菌后置于紫外滅菌的超凈操作臺