abi 7300的使用維護(hù)及校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)操作程序

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1、ABI7300的使用維護(hù)及校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)操作程序1、目的：ABIPRISM7300型核酸擴(kuò)增熒光檢測(cè)儀能夠正確和正常的使用，保證擴(kuò)增及結(jié)果分析的標(biāo)準(zhǔn)化、規(guī)范化。2、適用范圍：ABIPRISM7300型核酸擴(kuò)增熒光檢測(cè)儀。3、操作人：段建平蔡果4、操作程序4.1操作方法4.1開(kāi)機(jī)順序：先開(kāi)電腦，待電腦完全啟動(dòng)后再開(kāi)啟定量PCR儀主機(jī)，等主機(jī)面板上的綠燈亮后即可打開(kāi)ABI7300系統(tǒng)軟件，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。4.2創(chuàng)建熒光定量PCR檢測(cè)文件：4.2.1雙擊7300SystemSoftware軟件圖標(biāo)。從File菜單中選擇New（或單擊工具

2、欄中的“新建”按扭）4.2.2在NewDocument窗口中，Assay項(xiàng)選擇“AbsoluteQuantification(StandardCurve)”，選擇“完成”，就會(huì)出現(xiàn)一個(gè)96孔的空白面板。4.2.3雙擊此空白面板中的任一方格，就會(huì)彈出“WellInspector”。4.2.4在“WellInspector”窗口單擊“AddDetector”就會(huì)彈出“detectormanager”窗口。4.2.5點(diǎn)擊“FileNew...”，就會(huì)彈出“newdetector”菜單4.2.6在“newdetector”窗

3、口進(jìn)行樣本信息輸入：1）在“Name”可以輸入：HBV_20060101按自己的喜好輸入易于區(qū)分的name。2）在“ReporterDye”選擇所用試劑探針?biāo)捎玫膱?bào)告基團(tuán)如：FAM3）在“QuencherDye”選擇所用試劑探針?biāo)捎玫膱?bào)告基團(tuán)如：TAMRA4）在“Color”點(diǎn)擊右邊顏色小方格后可以按自己的喜好選擇顏色。5）設(shè)置好之后點(diǎn)擊OK會(huì)回到“detectormanager”窗口4.2.7在“detectormanager”窗口依次點(diǎn)擊“AddToPlateDocument”、“Done”。4.2.8完成了D

4、etector的設(shè)置；會(huì)重新回到“WellInspector”菜單,請(qǐng)做如下設(shè)置：1）在“PassiveReference”選折None；2）在“Use”下的小方框中打勾；3)在“SampleName”一般在參考標(biāo)準(zhǔn)品反應(yīng)孔中習(xí)慣性的輸入：試劑批次號(hào)如：HBV2006018。設(shè)置好之后關(guān)閉“WellInspector”菜單。4.3設(shè)置循環(huán)條件：4.3.1在Plate面板中選中“Instrument”，通過(guò)面板上的“AddCycle”、“AddStep”、“DataCollection”等按鈕，參照試劑說(shuō)明書設(shè)置好“In

5、strument”面板。4.3.2選擇File（文件）>SaveAs（另存為），為絕對(duì)定量反應(yīng)板文件輸入一個(gè)文件名，然后單擊Save（保存）。4.4推開(kāi)滑門，按照面板設(shè)置放好自己的試驗(yàn)樣品，關(guān)閉倉(cāng)門。4.5按下Start開(kāi)始PCR實(shí)驗(yàn)。在儀器運(yùn)行PCR程序期間，Instrument（儀器）選項(xiàng)卡上會(huì)顯示實(shí)時(shí)狀態(tài)信息，并報(bào)告熒光信號(hào)強(qiáng)度。程序運(yùn)行結(jié)束后，狀態(tài)值和按鈕變?yōu)榛疑?，而且Analysis（分析）按鈕()變?yōu)榭捎脿顟B(tài)，并顯示信息提示您程序是否成功運(yùn)行。程序運(yùn)行期間生成的所有數(shù)據(jù)都保存到步驟4.2.3中指定的絕對(duì)定量

6、反應(yīng)板文件中。4.6在反應(yīng)結(jié)束后按Save鍵儲(chǔ)存實(shí)驗(yàn)結(jié)果，關(guān)閉擴(kuò)增儀電源開(kāi)關(guān)。4.7實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析。4.7.1試驗(yàn)結(jié)束，為保險(xiǎn)起見(jiàn)，可再次保存試驗(yàn)結(jié)果到指定目錄，然后打開(kāi)試驗(yàn)結(jié)果*.sds文件4.7.2點(diǎn)擊“result”下有“Plate、Spectra、Component、AmplificationPlot、StandardCurve、Dissociation、Dissociation、Report”7個(gè)子目錄。4.7.3一般我們用“AmplificationPlot”項(xiàng)來(lái)觀察每孔的擴(kuò)增實(shí)時(shí)曲線4.7.4“Amplif

7、icationPlot”項(xiàng)的曲線有“l(fā)og值”和“求導(dǎo)后的線性值”的2種表現(xiàn)形式，通過(guò)“Tool→GraphSettings...”或通過(guò)鼠標(biāo)左鍵雙擊非曲線區(qū)依次選擊“l(fā)inear”→“OK”將“l(fā)og值”轉(zhuǎn)換到“線性值”曲線。4.7.5您可以通過(guò)點(diǎn)擊每個(gè)孔來(lái)觀察所對(duì)應(yīng)的擴(kuò)增的曲線來(lái)判斷該孔的結(jié)果。一般：依次看：“N”→“4S”(并設(shè)置好T值和基線)【定量：是指通過(guò)已知的標(biāo)準(zhǔn)參考品來(lái)判定未知】設(shè)置好T值和基線后，然后選中“N＋4S”按住鍵盤Ctrl不放手，依次點(diǎn)擊/再點(diǎn)擊某未知樣品孔來(lái)判定該孔樣品的擴(kuò)增曲線，并結(jié)合“P

8、late”、“Report”子目錄來(lái)定量該孔樣品的Qty值。4.2維護(hù)方法4.2.1微軟件WindowsNT工作站的維護(hù)硬盤驅(qū)動(dòng)器每月29日左右運(yùn)動(dòng)一次碎片清除程序，使用NortonUtilities或類似軟件。具體步驟：a)放入NortonUtilities光盤。b)MyComputer打開(kāi)NortonUtilities軟件光盤