口蹄疫正向間接血凝試驗操作要點

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1、口蹄疫正向間接血凝試驗操作要點免疫抗體檢測是科學(xué)掌握動物免疫接種疫苗后抗體產(chǎn)生和消長變化的有效方法之一。口蹄疫正向間接血凝試驗就是用口蹄疫抗原檢測未知血清中是否含有口蹄疫抗體的血清學(xué)檢測方法之一。近年來，此方法經(jīng)常用于牲畜接種口蹄疫疫苗后能否產(chǎn)生抗體或抗體滴度能否達(dá)到免疫保護(hù)，以利于指導(dǎo)畜牧業(yè)生產(chǎn)?！　∫?、原理　　用已知血凝抗原檢測未知血清抗體的試驗，稱為正向間接血凝試驗，亦稱間接血凝?！　】乖c其對應(yīng)的抗體相遇，在一定條件下形成抗原—抗體復(fù)合物。但這種復(fù)合物的分子團(tuán)很小，肉眼看不見。將抗原吸附

2、（致敏）在紅血球表面，再與抗體結(jié)合，紅血球便出現(xiàn)凝集現(xiàn)象，不僅肉眼能看見，而且反應(yīng)的敏感性大大提高?？谔阋哒蜷g接血凝試驗就是將口蹄疫純化病毒致敏到綿羊紅血球表面，制成口蹄疫血凝抗原，用于檢測動物血清中的口蹄疫抗體水平?！　《?、適用范圍　　主要用于檢測口蹄疫疫苗接種動物后血清抗體效價?！　∪?、器材　　1、96孔110～120度V型醫(yī)用血凝板，與血凝板大小相同的玻板?！　?、微量移液器與吸頭?！　?、口蹄疫血凝抗原（口蹄疫正向血凝診斷液）?！　?、口蹄疫對照陰性血清?！　?、口蹄疫對照陽性血清?！?/p>

3、　6、稀釋液。　　7、待檢血清（被檢血清）?！　∷?、試驗方法　　1、加稀釋液　　在血凝板上1～6排的1～9孔；第7排的1～4孔；第8排的1～12孔各加稀釋液50微升?！　?、稀釋待檢血清　　取1號待檢血清50微升加入第1排第1孔，混勻（避免產(chǎn)生過多的氣泡），取出50微升移入第2孔，混勻后取出50微升移入第3孔……直到第9孔混勻后取出50微升丟棄。此時第1排1～9孔待檢血清的稀釋度（稀釋倍數(shù)）依次為：1:2，1:4，1:8，1:16，1:32，1:64，1:128，1:256，1:512。　　取2

4、號待檢血清加入第2排；取3號待檢血清加入第3排……均按上法稀釋，注意！每取一份血清時，必須更換吸頭一個?！　?、稀釋陰性對照血清　　在血凝板上的第7排第1孔加陰性血清50微升，倍比稀釋至第4孔，混勻后從該孔取出50微升丟棄。此時陰性血清對照孔依次為：1:2，1:4，1:8，1:16?！　?、稀釋陽性對照血清　　在血凝板上的第8排第1孔加入陽性血清50微升，倍比稀釋至第12孔，混勻后從該孔取出50微升丟棄，此時陽性血清稀釋倍數(shù)為1:2～1:4096?！　?、加血凝抗原　　被檢血清各孔、陰性對照血清

5、各孔、陽性對照血清各孔、稀釋液對照孔均各加血凝抗原25微升?！　?、振蕩混勻　　將血凝板置于微量振蕩器上振蕩1分鐘，然后將血凝板放在白紙上觀察各孔紅血球是否混勻，不出現(xiàn)血球沉淀為合格。蓋上玻板，靜置于室溫下1.5～2小時判定結(jié)果，也可延至翌日判定?！　?、判定標(biāo)準(zhǔn)　　移去玻板，將血凝板放在白紙上，先觀察陰性對照血清1:16孔，稀釋液對照孔，應(yīng)無凝集，或僅出現(xiàn)“+”凝集?！　￡栃匝鍖φ?:2～1:256各孔應(yīng)出現(xiàn)“++~++++”凝集為合格?！　≡趯φ湛缀细竦那疤嵯拢儆^察待檢血清各孔，以呈現(xiàn)“

6、++”凝集的最大稀釋倍數(shù)為該份血清的抗體效價。例如1號待檢血清1～5孔呈現(xiàn)“++~++++”凝集，6~7孔呈現(xiàn)“++”凝集，第8孔呈現(xiàn)“+”凝集，第9孔無凝集，那么就可判定該份血清的口蹄疫抗體效價為1:128?！　〗臃NO型口蹄疫滅活苗的豬群血清O型抗體效價達(dá)到1:128（或1:128以上）為免疫合格。　　五、注意事項　　1、試驗前，必須仔細(xì)閱讀試劑盒內(nèi)的說明書?！　?、嚴(yán)重溶血或嚴(yán)重污染的血清樣品不宜檢測，以免發(fā)生非特異性反應(yīng)。　　3、為確保試驗判斷準(zhǔn)確，不得使用90度和130度血凝板。　　4、

7、血凝板用后應(yīng)及時在水龍頭下沖凈血球，再用蒸餾水或去離子水沖洗3次，甩干水分放　37℃　恒溫箱內(nèi)干燥備用。檢測用具應(yīng)煮沸消毒，再置于　37℃　恒溫箱內(nèi)干燥備用。　　5、每次檢測做一份陰性、陽性和稀釋液對照即可。