植物內生真菌的分離

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1、微生物學大實驗----植物內生真菌的分離學院：生命科學學院年級：2013級班級：生物技術2班姓名：李丹學號：41308267植物內生真菌的分離植物內生菌(Endophyte)是指那些在其生活史的一定階段或全部階段生活于健康植物的各種組織和器官內部的真菌或細菌，而宿主植物一般不表現(xiàn)出外在的癥狀。實驗目的了解微生物存在的普遍性和多樣性掌握常規(guī)的微生物分離純化方法培養(yǎng)實驗創(chuàng)新能力實驗材料健康無病蟲害的植物例如山茱萸或其它植物的(根)、莖、葉試劑：次氯酸鈉(或雙氧水或氯化汞）、無水乙醇、葡萄糖、瓊脂、青霉素、鏈霉素培養(yǎng)基：PDA培養(yǎng)基、分離培養(yǎng)基實驗步驟配制PDA培養(yǎng)基配制分離培養(yǎng)基采集新鮮植物

2、的根、莖、葉、果實植物組織表面消毒接種分離與純化菌種保藏PDA配制方法土豆200g，去皮切小塊，煮沸30min，4層紗布過濾，濾液加熱，加入瓊脂15克，瓊脂完全融化后加入葡萄糖20g，待稍冷卻后加水至1升即可。分離培養(yǎng)基的配制滅菌后的培養(yǎng)基加入青霉素100mg／L、鏈霉素200mg／L即可植物組織表面消毒的方法將新鮮、健康的板藍根（山茱萸或女貞）的根、莖、葉于自來水下沖洗干凈，瀝干表面水分后剪成小段（片）做如下表面消毒處理：75%酒精漂洗3min，無菌水沖洗4~5次，5%次氯酸鈉溶液漂洗葉2-3min、莖5-7min、根5-7min，無菌水沖洗4~5次，無菌濾紙吸干水分。將上述表面消毒后

3、的材料剪切成0.5cm2小塊，放入含有分離培養(yǎng)基的平板中（4塊／每板）28℃恒溫培養(yǎng)3~10天，待組織塊邊緣長出菌絲后及時挑取，將其轉入另一PDA平板培養(yǎng)，重復操作直至純化，4℃斜面保存。對照：（設置兩個）(1)最后一次表面消毒的無菌水，移接至PDA平板。（2）消毒后的植物組織，在PDA分離平板上輕輕按壓即為印記平板對照。注意事項注意消毒時間，設計對照組，檢驗表面消毒是否徹底。做印記對照時，要用完整的組織材料在平板上輕輕按壓即可。思考題表面消毒時間過長或過短會出現(xiàn)什么問題？實驗中為什么設置對照組？怎樣能夠盡可能多的分離植物內生真菌？分析內生真菌分離不完全的原因。