醋酸菌菌種分離篩選方法

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1、醋酸菌菌種分離篩選方法醋酸菌的細(xì)胞為橢圓至桿狀，單個成雙或成鏈，鞭毛周生或端生，運(yùn)動或不運(yùn)動，革蘭氏陰性菌，好氧菌，一般在乙醇或其他可氧化物的酵母煮液或酵母消化液培養(yǎng)基生長旺盛。醋酸的鈉鹽和鈣鹽與三氯化鐵共熱，生成紅褐色沉淀，原液變成無色?？蛇M(jìn)行分離菌鑒別。1.培養(yǎng)基：1.1米曲汁乙醇碳酸鈣培養(yǎng)基：米曲汁（10-12BX）1000mlCaCO310-15g95℅乙醇30-40ml（滅菌后加入）PH自然1.2葡萄糖碳酸鈣培養(yǎng)基：葡萄糖15g/L酵母膏10g/LCaCO315g/LPH6.81.3乙醇30mL/L酵母膏10g/L葡萄糖10g/LCaCO

2、310-15g/L（常規(guī)篩選培養(yǎng)基）PH6.8-7.0注：常規(guī)培養(yǎng)基中的碳酸鈣易沉淀，平板不易觀察到透明圈，選擇米曲汁乙醇碳酸鈣培養(yǎng)基為好。1.4醋酸菌保存培養(yǎng)基：酵母膏15g/L葡萄糖10g/LCaCO315-20g/L瓊脂15-20g/L3-4滴乙醇/試管。1.5液體種子和發(fā)酵培養(yǎng)基：乙醇30-35mL/L膏酵母10g/葡萄糖10g/LKH2PO40.5g/LMgSO40.5g/LPH6.5-6.82.菌種篩選：2.1集菌：1-2g（5ml）樣品，在無菌下加入30-50ml/250ml米曲汁乙醇液體培養(yǎng)基（0.5ml0.02℅結(jié)晶紫醋酸溶液/1

3、003ml培養(yǎng)液）中，30-33℃震蕩培養(yǎng)24-48h，集菌液PH明顯下降，有醋味，鏡檢細(xì)胞革蘭氏染色陰性。形態(tài)與醋酸菌相符即可分離。2.2混菌法分離：（分離及初篩）適度稀釋10-5、10-6、10-7取1.0ml菌液置于無菌平板或涂布中，每個梯度平行兩次，米曲汁乙醇碳酸鈣培養(yǎng)基倒平板，30℃24-48h，觀察有小菌落出現(xiàn)，菌落周圍形成透明圈，圈的大小因菌而異。挑透明圈出現(xiàn)早且菌落豐厚，邊緣整齊，生長旺盛不同的菌落轉(zhuǎn)接于曲汁乙醇碳酸鈣斜面，30-33℃24-48h。根據(jù)菌落周圍溶解透明圈大小初步篩選出產(chǎn)酸高的菌種。2.3性能測定：（復(fù)篩）不同菌落接

4、種于液體曲汁乙醇培養(yǎng)基（30-50ml/250ml）中，30℃震蕩培養(yǎng)24-48h。2.3.1鏡檢：染色鏡檢細(xì)胞整齊，橢圓或短桿狀，革蘭氏陰性菌。2.3.2性能測定：醋酸定性分析：取發(fā)酵液（離心去菌體）5.0ml于潔凈試管中，用10℅氫氧化鈉中和PH至7.0，加入1℅三氯化鐵溶液2-3滴，搖勻，觀察溶液是否變黃褐色，加熱共沸，形成紅褐色沉淀，原液變無色者為產(chǎn)醋酸細(xì)菌。生酸量測定：1.0ml發(fā)酵液于150ml三角瓶中，加中性蒸餾水10-20ml，酚酞指示劑2滴，用0.1mol/l氫氧化鈉滴定至微紅色。醋酸量（g/100mL）=氫氧化鈉摩爾濃度.Vx6

5、0.06x10-3/樣品毫升數(shù)x1003同時，進(jìn)行單因素試驗(yàn)，分別考察醋酸速度，耐高溫，耐酒精度，耐低酸度等主要生產(chǎn)性能，選擇優(yōu)勢菌株。3