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1、鎘對小鼠睪丸精子生成的影響及其分子機制【摘要】目的:研究鎘暴露對雄性小鼠精子生成的影響及其分子機制。方法:分別以1、5、10μmol/kg濃度氯化鎘腹腔連續(xù)暴露小鼠，每天1次，連續(xù)5d，測定睪丸指數(shù)和精子相對計數(shù)；同時應(yīng)用單細(xì)胞凝膠電泳（single-cellgelelectrophoresis，SCGE）技術(shù)檢測睪丸生精細(xì)胞DNA損傷率和遷移長度。結(jié)果:三種劑量氯化鎘處理組睪丸指數(shù)顯著低于對照組（P<0.001），睪丸精子相對計數(shù)也顯著低于對照組（P<0.05、P<0.001），生精細(xì)胞DNA損傷率和慧星細(xì)胞遷移長度顯著高于對照組（P<0.
2、001），且隨劑量增加DNA損傷率和慧星細(xì)胞遷移長度也顯著增加。結(jié)論:DNA鏈斷裂可能是鎘引起生精障礙的機制之一?！娟P(guān)鍵詞】氯化鎘睪丸指數(shù)DNA損傷單細(xì)胞凝膠電泳Abstract:Objective:Tostudythemolecularmechanismofcadmiumchlorideonthedamageofspermatogeniccelldamage.Methods:Malemiceinisterediumchlorideof1、5、10μmol·kg-1·d-1iprespectivelyfor5day.Todeterminethetestisindex
3、andspermcount,theproportionofDNAdamageandlengthofDNAmigrationsofspermatogeniccellinediumchloridegroupcountagerateandlengthofDNAmigrationsofspermatogeniccellalgroup(P<0.001),andthedamageiumchloride.Conclusion:TheDNAstrandbreakmaybeoneofthepossiblemechanismofcadmiumchlorideonspermatog
4、eniccelldamage.Keyiumchloride;testisindex;DNAdamage;singlecellgelelectrophoresis鎘是一種有毒的重金屬，是已知的最易在體內(nèi)蓄積的環(huán)境毒物，對生殖系統(tǒng)有較敏感的毒性作用。隨著現(xiàn)代工業(yè)的迅猛發(fā)展鎘污染問題日益嚴(yán)重，大量的研究表明少量的鎘進入人體即可通過生物放大作用和生物積累，對動物器官特別是睪丸及其細(xì)胞產(chǎn)生毒性作用，但鎘對細(xì)胞毒性特別是對生殖細(xì)胞的毒性作用的機制尚不完全清楚。本研究觀察了鎘染毒處理后雄性小鼠睪丸指數(shù)和精子相對計數(shù)的變化，并用單細(xì)胞凝膠電泳技術(shù)檢測鎘對生精細(xì)胞的遺傳損傷作用，以探
5、討鎘對生殖細(xì)胞毒性的機制。1材料和方法1.1材料正常融點瓊脂糖（Promega公司產(chǎn)品），低融點瓊脂糖（Promega公司產(chǎn)品），二甲基亞砜（Sigma公司產(chǎn)品），十二烷基肌氨酸鈉（華美生物工程公司產(chǎn)品），TritionX-100（FARCO公司產(chǎn)品），溴乙錠（Sigma公司產(chǎn)品），AR級氯化鎘（中國醫(yī)藥上?；瘜W(xué)試劑公司產(chǎn)品）。1.2動物清潔級健康雄性ICR小鼠32只，體重（25±2）g，由溫州醫(yī)學(xué)院實驗動物中心提供（醫(yī)動字220030002號）。1.3動物分組與處理取32只ICR雄性小鼠隨機分為4組，每組8只，分別于腹腔注射氯化鎘1、5、10μmol/kg，每天1
6、次，連續(xù)5d，對照組注射等體積生理鹽水。于暴露第6天處死小鼠，取睪丸進行各項指標(biāo)測定。1.4睪丸指數(shù)和精子相對計數(shù)測定處死小鼠后稱體重，取出雙側(cè)睪丸稱重，計算睪丸指數(shù)[1]。睪丸精子相對計數(shù)測定參考Blazak等[2]方法進行，取左側(cè)睪丸去除包膜，精確稱重，移至組織勻漿管，加2mlPBS，在勻漿器中勻漿，勻漿好后用血球計數(shù)板計數(shù)，重復(fù)4次，取平均值。睪丸精子相對計數(shù)用以下公式計算：總精子數(shù)/去膜后睪丸重量。1.5生精細(xì)胞DNA損傷率和彗星遷移長度測定采用單細(xì)胞凝膠電泳法，取小鼠右側(cè)睪丸，PBS制成細(xì)胞懸液，調(diào)細(xì)胞密度至0.3～0.6×1010個/L，測定細(xì)胞活力大于
7、90%后參照文獻[3，4]方法進行單細(xì)胞凝膠電泳，溴乙錠染色，熒光顯微鏡觀察。每個樣本計數(shù)50個細(xì)胞，每組共計數(shù)400個細(xì)胞，計算“調(diào)亡彗星”細(xì)胞的百分率。根據(jù)彗星尾部的DNA含量占細(xì)胞總DNA的比例，將DNA損傷程度分為5級[5]：0級：<5%，無損傷，細(xì)胞核完整；1級：5%～20%，中度損傷，可見彗尾，細(xì)胞核縮?。?級：20%～40%，中度損傷，可見明顯彗尾，細(xì)胞核縮小；3級40%～95%，重度損傷，彗尾熒光信號強而密，并見明顯縮小的細(xì)胞核；4級：>95%，完全損傷。每組測量50個細(xì)胞慧星尾長，計算慧星細(xì)胞遷移率。(責(zé)任編輯：admin)1.6統(tǒng)
