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《亞慢性苯暴露對小鼠精子生成的影響及表觀遺傳機(jī)制研究》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、萬方數(shù)據(jù)論文題目：堊慢絲苤墨噩牡叢!基猹王生盛趁絲喧區(qū)蠢理遺佳扭劍砑塞答辯委員會主席：曾±基數(shù)拯答辯委員會成員：黃陳平教授酆紅握塾堡萬方數(shù)據(jù)溫州醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文目錄中文摘要．．．．?．．?．．．．．．．．??．．．?．?．．．．．．．．．．．．．1英文摘要?．．．．．．．．．．．?????．．?．．?．．．．．．．?3前言．．．????????????????．．6材料與方法???????．???．?????9結(jié)果．．．．．．．?．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．?．?．．．．．．．．．19討論?．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．
2、．?．．．．．．．．．．．．．．．．?26附錄．．．．．?．．．．．．．?．．．．．．．．．．．．．．．．．．．?．．．．．．．．．．．．33致謝．．．．．．．．．．．．?．．．．．．．．．．．．．?．．．．．．．．．．．．．?．．．．．34綜述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．??．．．．．．??．．．．．．．．．．．35學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明????????????．．43關(guān)于學(xué)位論文使用授權(quán)聲明．．．??????．．．．．．．?．43萬方數(shù)據(jù)溫州醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文中文摘要亞慢性苯暴露對小鼠精子生成的影響及表觀遺傳機(jī)制研究背景：苯被廣泛應(yīng)用于工業(yè)生產(chǎn)和日常
3、生活，暴露難于避免。盡管苯主要損害造血系統(tǒng)，但苯的雄性生殖毒性也被一些研究所報道。目前己觀察到苯接觸工人的精子數(shù)量下降，異常形態(tài)精子比例增加，精子DNA損傷，非整倍體和染色體結(jié)構(gòu)畸變精子的比率增加等現(xiàn)象。毒理學(xué)研究也顯示，亞慢性苯吸入暴露可導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)小鼠的精子濃度降低、活力下降，提示苯對精子生成具有明確的毒性作用。然而，苯對生精過程不同階段的影響特征還不清楚。表觀遺傳學(xué)(epigenetics)的興起，為苯毒性機(jī)制研究提供了新的視角和方向。其中，DNA甲基化與MicroRNA(miRNA)調(diào)控是表觀遺傳調(diào)控的主要內(nèi)容，并且在睪丸發(fā)育及精子生成等過程中也起著重要的調(diào)控作用。
4、本研究通過檢測亞慢性苯暴露對小鼠精子生成的損傷狀況，以揭示苯對生精過程的損傷特征：并通過相關(guān)基因甲基化的變化和miRNA的表達(dá)的檢測，以探討苯對精子生成損傷的表觀遺傳機(jī)制。材料方法：1．亞慢性苯吸入染毒：6～8周齡的C57BL／6J雄性小鼠，按體重隨機(jī)分為3組，分別為對照組、lppm和100ppm苯暴露組。模擬職業(yè)暴露情況，實(shí)施每天8小時，每周5天，共13周的亞慢性動式吸入染毒。2．睪丸病理學(xué)檢測：HE染色觀察睪丸組織病理學(xué)改變。3．精細(xì)胞marker基因表達(dá)檢測：選取精子發(fā)生中階段特異性表達(dá)基因，作為不同生精階段精細(xì)胞的marker，選定的marker基因有代表A型精
5、原細(xì)胞的Plzf，分化型精原細(xì)胞的Stra8，初級精母細(xì)胞I拘Sycp3，圓形精子的Tnpl、Tnp2，長形精子的Akap4，以及魚精蛋白Prml、Prm2，采用實(shí)時熒光定量PCR檢測睪丸marker基因的mRNA表達(dá)。4．DNA甲基轉(zhuǎn)移酶表達(dá)檢測：選取4種DNA甲基轉(zhuǎn)移酶Dnmtl、Dnmt3a、Dnmt3b、Dnmt31，用實(shí)時熒光定量PCR檢測其睪丸組織的mRNA表達(dá)。5．基因甲基化程度檢測：利用飛行時間質(zhì)譜法(MALDI．TOF．MS)定量檢測Tnpl、Prm2基因的甲基化水平。6．miRNA表達(dá)檢測：利用PicTar、T撕getScan和MiRanda三個軟件
6、共同預(yù)測基因的靶miRNA。依據(jù)預(yù)測結(jié)果，并結(jié)合文獻(xiàn)報道，分別選取了"TnpI的靶miRNA萬方數(shù)據(jù)溫州醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文是miR．181b．5p、Tnp2的靶miRNA是miR．122．5p、Prml的靶miRNA是miR-484、Prm2的靶miRNA是miR．24．3p，采用實(shí)時熒光定量PCR檢測睪丸miRNA表達(dá)。結(jié)果：1．睪丸病理學(xué)檢測分析：苯暴露組小鼠睪丸組織呈現(xiàn)嗜酸性染色增強(qiáng)，lppm組出現(xiàn)少量核溶解和細(xì)胞脫落現(xiàn)象，其病理意義尚不明確；100ppm組小鼠睪丸生殖細(xì)胞變性、壞死的明顯增多，管腔中心無(或少)細(xì)胞的曲細(xì)精管數(shù)量明顯增多，表明亞慢性苯暴露可引起
7、小鼠睪丸的病理改變。2．marker基因表達(dá)分析：與對照組比較，苯暴露組marker基因Plzf、Stra8、Sycp3、Akap4的mRNA表達(dá)均未顯示統(tǒng)計學(xué)差異；而lppm組Prm2I拘mRNA表達(dá)顯著降低(戶
