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1、芍藥甙對(duì)大鼠海馬神經(jīng)元的保護(hù)作用論文【關(guān)鍵詞】芍藥甙；缺氧；海馬神經(jīng)元；抗氧化劑Neuroprotectiveeffectofpaeoniflorinonanoxicallyculturedrathippocampalneurons【Abstract】AIM:Toinvestigatepalneurons.METHODS:Hippocampalneuronslyinto4groupsaccordingtodifferentculturemediumsaddedol/Lnimodipine,40or80μmol/Lpaeoniflorin,ornoanymedicine(asc
2、ontrolgroup).AcuteanoxiamodelL/LNO2+50mL/LCO2mixturegases.Theviablecellsethod.Theapoptosisrateanddeathrateofhippocampalneuronsetry(FCM).ThecontentsofMDAandNOandtheactivitiesofSODinthesupernatantsofcellcultureinedbybiochemicalmethods.RESULTS:Inparisonpalneurons,palneuronsagainstanoxicinjury.
3、Themechanismunderlyingthiseffectofpaeoniflorinmaybemediatedbyeliminatingthefreeradicals,byincreasingtheactivitiesofantioxidativeenzymestoinhibittheoxidativedamagescausedbyanoxia.【Keypalneurons;antioxidants【摘要】目的：觀察缺氧對(duì)大鼠海馬神經(jīng)元的影響及芍藥甙的保護(hù)作用.方法：采用細(xì)胞培養(yǎng)方法獲取10~14d的海馬神經(jīng)元,將藥物加入到培養(yǎng)液中，4h后建立950mL/LNO2+5
4、0mL/LCO2混合氣體急性缺氧模型,臺(tái)盼藍(lán)染色細(xì)胞計(jì)數(shù)并做流式細(xì)胞儀檢測(cè),以及酶法測(cè)定抗氧化酶（超氧化物岐化酶SOD）的抗氧化能力及丙二醛（MDA）.freela公司).CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱(上海?，攲?shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司),垂直單向流型YJ超凈工作臺(tái)（蘇州市潔凈技術(shù)研究所）.1.2方法1.2.1海馬神經(jīng)元的培養(yǎng)和分組按已有的細(xì)胞培養(yǎng)方法［3］,取大鼠消毒,斷頭,分離出雙側(cè)海馬,剪碎成1cm3的組織塊,加入1.25g/L胰酶消化30min,用含有100mL/L胎牛血清及100mL/L馬血清的種植培養(yǎng)液終止胰酶的作用.制成細(xì)胞懸液（1×109/L）接種到6孔板中(2mL/孔),置于37
5、℃50mL/LCO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h,更換維持培養(yǎng)液（50mL/L胎牛血清,100mL/L馬血清）,以后每3d半量換液1次,第4~5日加入阿糖胞苷,終濃度為5mg/L(25μL/皿).接種10~14d的海馬神經(jīng)元隨機(jī)分為4組,即對(duì)照組,尼莫地平5μmoL/L組,芍藥甙40μmoL/L組,芍藥甙80μmoL/L組.每組4個(gè)6孔板：將所用藥物加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中進(jìn)行孵育.1.2.2尼氏染色鑒定神經(jīng)元將培養(yǎng)的海馬神經(jīng)元經(jīng)0.02mol/LPBS(pH7.4)漂洗1~2次,40g/L多聚甲醛溶液固定1h,PBS漂洗后,10g/L甲苯胺藍(lán)染液染色20min,950mL/L乙醇分色,37
6、℃干燥,二甲苯透明,中性樹(shù)脂封片.1.2.3缺氧模型的制備［4］4h后將已分組給藥的培養(yǎng)板移入37℃恒溫密閉容器中,連續(xù)充以950mL/LNO2+50mL/LCO2混合氣體,流速為20mL/min,持續(xù)1h.1.2.4海馬神經(jīng)元細(xì)胞凋亡率的檢測(cè)將上述處理過(guò)的細(xì)胞制成單細(xì)胞懸液,1000r/min離心10min,去上清,PBS沖洗,700mL/L乙醇固定,400目的篩網(wǎng)過(guò)濾,加PI染液,上流式細(xì)胞儀檢測(cè).1.2.5海馬神經(jīng)元上清液中SOD,MDA和NO的測(cè)定按試劑盒說(shuō)明書(shū)的要求先求出樣本的最佳加樣量,海馬神經(jīng)元經(jīng)上述同樣處理后,取細(xì)胞上清液,按試劑盒說(shuō)明書(shū)的要求操作,測(cè)定各樣本
7、的吸光度,并依下列公式計(jì)算出SOD,MDA和NO的含量.SOD活力(U/mL)=(對(duì)照管吸光度-測(cè)定管吸光度)/對(duì)照管吸光度/50%×反映體系的稀釋倍數(shù)×樣本測(cè)試前的稀釋倍數(shù)MDA含量(μmol/L)=(測(cè)定管吸光度-測(cè)定空白管吸光度)/(標(biāo)準(zhǔn)管吸光度-標(biāo)準(zhǔn)空白管吸光度)×標(biāo)準(zhǔn)品濃度(10μmol/L)×樣本測(cè)試前稀釋倍數(shù)NO含量(μmol/L)=(測(cè)定管吸光度-空白管吸光度)/(標(biāo)準(zhǔn)管吸光度-空白管吸光度)×標(biāo)準(zhǔn)品濃度(100μmol/L)×樣品測(cè)試前稀釋倍數(shù)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用x±s表示,用簡(jiǎn)明統(tǒng)
