腫節(jié)風(fēng)藥材采收部位與最佳采收期的研究

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1、腫節(jié)風(fēng)藥材采收部位與最佳采收期的研究李成仁王園園李小艷宋曉虹韋琪生蔣林葉創(chuàng)興【摘要】目的確定腫節(jié)風(fēng)藥材的采收部位與最佳采收期。方法分別將采得的不同季節(jié)腫節(jié)風(fēng)藥材分為根、莖、葉3部分，以60%乙醇為溶劑回流提取。采用高效液相色譜法測定不同季節(jié)腫節(jié)風(fēng)藥材各部位中反丁烯二酸和異嗪皮啶的含量；以紫外分光光度法測定其總黃酮的含量。結(jié)果腫節(jié)風(fēng)藥材葉中總黃酮含量最高，莖中反丁烯二酸含量最高，根中異嗪皮啶含量最高，綜合考慮3種有效成分，以6月、8月含量最高。結(jié)論6月、8月份為腫節(jié)風(fēng)藥材的最佳采收期，以全株采收為宜。

2、【關(guān)鍵詞】腫節(jié)風(fēng)藥效成分采收期采收部位腫節(jié)風(fēng)為金粟蘭科植物草珊瑚Sarcandraglabra(Thunb.)Nakai的干燥全草，又名九節(jié)茶、接骨木等，主要分布于我國華南、華東、西南各省區(qū)，在朝鮮、日本、東南亞和印度也有分布?！吨袊幍洹?005年版（Ⅰ部）中記載其具有清熱涼血、活血消斑、祛風(fēng)通絡(luò)的功效，可用于治療血熱紫斑、紫癜、風(fēng)濕痹痛、跌打損傷等癥〔1〕。現(xiàn)代藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)表明，腫節(jié)風(fēng)具有抗菌消炎、抗腫瘤等作用，已制成各種劑型用于各種炎癥和癌癥的輔助治療。其主要藥效成分為反丁烯二酸、異嗪皮啶和黃酮

3、類化合物〔2〕。腫節(jié)風(fēng)中反丁烯二酸和異嗪皮啶的含量可采用高效液相色譜法進(jìn)行測定〔3，4〕，黃酮類化合物可通過紫外分光光度法測定〔5〕。本實(shí)驗(yàn)采取3種藥效成分同時考察的方法，對不同生長季節(jié)的腫節(jié)風(fēng)以及不同部位藥用價(jià)值進(jìn)行評估，為腫節(jié)風(fēng)藥材的采收提供依據(jù)?！　?儀器與試藥　　1.1儀器erck公司），磷酸（色譜純，F(xiàn)luka公司），Mili-Q超純水，其余試劑均為分析純?！　∧[節(jié)風(fēng)藥材采于廣西東蘭縣腫節(jié)風(fēng)藥材GAP基地，自2007-05～2007-12每月采全株樣，根、莖、葉分開，60℃下烘干。　　2方

4、法與結(jié)果　　2.1對照品溶液的制備　　2.1.1總黃酮對照品溶液精確稱取蘆丁對照品20mg，置于50ml容量瓶中，加蒸餾水溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成濃度為0.4mg/ml蘆丁對照品溶液〔5〕?！　?.1.2反丁烯二酸與異嗪皮啶對照品溶液精確稱取反丁烯二酸對照品7.5mg，異嗪皮啶對照品1.8mg，置25ml容量瓶中，加蒸餾水溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成混合對照品溶液(含反丁烯二酸0.3mg/ml，異嗪皮啶0.072mg/ml)?！　?.2供試品溶液的制備準(zhǔn)確稱取干燥，粉碎，過3號篩的腫節(jié)風(fēng)藥材根、

5、莖、葉粉末各0.5g，置250ml燒瓶中，按1∶30的料液比分別加入60%乙醇回流提取1h，過濾后重復(fù)提取2次，合并濾液，減壓濃縮至干，以蒸餾水溶解殘物，定容至25ml，備用?！　?.3總黃酮測定波長的選擇取蘆丁對照品溶液0.5ml，置10ml容量瓶中，用30%的乙醇補(bǔ)充至5ml，加入5%NaNO2溶液0.3ml，放置5min，加入10%Al(NO3)3溶液0.3ml，6min后加入4%NaOH溶液2.0ml，此時溶液顯紅色，混勻后以30%乙醇稀釋至刻度，靜置10min后于紫外分光光度計(jì)下進(jìn)行全波長

6、光譜掃描，在500nm處有最大吸收值，因此以500nm作為總黃酮的檢測波長?！　?.4色譜條件色譜柱為AgilentHypersilODSC18柱（4.6mm×250mm，5μm）；流動相A為0.05%磷酸水溶液；流動相B為乙腈；檢測波長210nm；柱溫35℃。梯度條件0～8min流動相B5%；8～30minB5%～12%；30～45minB12%～19%。經(jīng)測試，樣品峰分離度在1.5以上，反丁烯二酸理論塔板數(shù)在5000以上，異嗪皮啶理論塔板數(shù)在10000以上?！　?.5標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制　　2.5.1

7、總黃酮標(biāo)準(zhǔn)曲線分別取蘆丁對照品溶液0，0.25，0.5，0.75，1.25，1.5ml于10ml的容量瓶中，按“2.3”項(xiàng)下方法處理后，于紫外分光光度計(jì)下測定吸光值，檢測波長500nm。以標(biāo)樣濃度為橫坐標(biāo)，吸光值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到回歸方程Y=9.4975X+0.0413,r=0.9999，線性范圍：0.01～0.06mg/ml。　　2.5.2反丁烯二酸與異嗪皮啶標(biāo)準(zhǔn)曲線精確吸取體積為0.04，0.2，0.4，2，4，6，8ml的反丁烯二酸與異嗪皮啶混合對照品溶液于25ml的容量瓶中，加水稀釋

8、至刻度，定容后以0.45μm微孔濾膜過濾，精確吸取20μl，注入高效液相色譜儀測定。以進(jìn)樣質(zhì)量為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，分別得反丁烯二酸和異嗪皮啶的回歸方程為：Y=6966848.6362X+702737.2867，r=0.9996；Y=14391526.5254X+221002.0133，r=0.9998；線性范圍：反丁烯二酸0.024～4.8μg；異嗪皮啶0.006～1.152μg?！　?.6方法學(xué)考察　　2.6.1總黃酮方法學(xué)考察　　精密度實(shí)驗(yàn)：取