湖北貝母有效部位提取工藝的研究

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1、湖北貝母有效部位提取工藝的研究徐仿周陳昶阮漢利張勇慧皮慧芳吳繼洲【摘要】　　目的優(yōu)選湖北貝母有效部位即總生物堿的最佳提取工藝。方法采用正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，測(cè)定不同提取條件所得總生物堿的含量及收率，結(jié)合各實(shí)驗(yàn)樣品藥理效應(yīng)強(qiáng)弱的評(píng)價(jià)，優(yōu)選出湖北貝母有效部位的最佳提取工藝。結(jié)果當(dāng)提取條件為以50％EtOH提取3次，1h/次，4倍體積/次時(shí)，湖北貝母有效部位總生物堿的收率最高，其鎮(zhèn)咳和平喘的綜合藥效最強(qiáng)，經(jīng)過(guò)穩(wěn)定性驗(yàn)證后，將該工藝確定為湖北貝母有效部位的最佳提取工藝。結(jié)論該研究以化學(xué)指標(biāo)和藥效指標(biāo)相結(jié)合的方法來(lái)優(yōu)選湖北貝母有效部位的最佳提取工藝，相對(duì)

2、單純化學(xué)指標(biāo)來(lái)說(shuō)更為科學(xué)和可信，可以有效防止以單純化學(xué)指標(biāo)優(yōu)選出的工藝與藥理效應(yīng)不一致時(shí)的偏差，使優(yōu)選出的工藝真正為活性導(dǎo)向下藥材有效部位的最佳提取工藝?！娟P(guān)鍵詞】湖北貝母正交設(shè)計(jì)藥效篩選提取工藝　　Abstract：ObjectiveTooptimizetheextractionprocessoftheactivefraction(thetotalalkaloids)fromtheBulbsofFritillariaehupehensis.MethodsApplyingorthogonaldesigninthisstudy，pleso

3、fBulbusFritillariaehupehensis.Andthenumextractionprocessthroughassayingthetotalalkaloidsyieldsofthesesamplesandscreeningtheirantitussive,expectorantandantiasthmaticactivities.ResultsETTERTOLEDOAG285型電子天平?！　?.2試劑湖貝甲素對(duì)照品，本教研室吳繼洲教授提供；各種化學(xué)試劑，國(guó)產(chǎn)分析純。　　1.3動(dòng)物昆明種小鼠，雌雄兼用，體重（20±2）g

4、；豚鼠，雌雄兼用，體重(170±20)g，均由本校實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供?！　?方法與結(jié)果　　2.1總生物堿的含量測(cè)定采用酸性染料比色法〔2，3〕?！　?.1.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密稱取湖貝甲素對(duì)照品10.00mg，置50ml容量瓶中，用氯仿溶解并加至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。分別精密吸取該對(duì)照品溶液0，0.5，1.0，1.5，2.0，2.5ml置25ml容量瓶中，加鄰苯二甲酸氫鉀緩沖液(pH=4.5)5ml，溴甲酚綠2ml，再加氯仿至刻度，充分搖勻，移入分液漏斗中，靜置10min分層，取下層液于415nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。將吸光度與相應(yīng)的濃

5、度作回歸處理，得回歸方程為A=7.095-3+2.644X，r=0.9996(A為樣品溶液吸光度值，X為樣品含生物堿的毫克量)　　2.1.2提取物中總生物堿含量的測(cè)定分別精密稱取等量樣品總生物堿浸膏適量，用氯仿溶解定容至50ml，搖勻后分別精密吸取各樣品液0.20ml置于25ml容量瓶中，加鄰苯二甲酸氫鉀緩沖液（pH=4.5）5ml，溴甲酚綠指示劑2ml，搖勻，加氯仿至刻度，按上述標(biāo)準(zhǔn)曲線下操作方法測(cè)定各樣品的吸光度并計(jì)算各樣品中生物堿的含量及產(chǎn)率?！　?.2正交設(shè)計(jì)考察提取時(shí)間、提取次數(shù)和溶媒體積在以往湖北貝母總生物堿提取分離研究的基

6、礎(chǔ)上，本文選取提取時(shí)間，提取次數(shù)和溶媒體積（50％EtOH）為考察因素，各因素相應(yīng)安排了3個(gè)水平，選用L9(34)正交表安排實(shí)驗(yàn)。因素水平的安排見(jiàn)表1。　　將湖北貝母鱗莖研成粉末，過(guò)20目篩，分別稱取該粉末80g，按表1安排實(shí)驗(yàn)，回收并濃縮各提取液，經(jīng)酸堿處理后，再以醋酸乙酯萃取，直至水層對(duì)Draggendorf's試劑不顯色，回收醋酸乙酯萃取液并濃縮成浸膏。將各實(shí)驗(yàn)樣品所得浸膏轉(zhuǎn)移入已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，在相同條件下于60℃烘箱中干燥2h，取出，置干燥器中冷卻30min后立即稱重，計(jì)算各樣品浸膏得率，并進(jìn)行生物堿含量測(cè)定，計(jì)算各樣品

7、總生物堿的收率(%)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果及方差分析見(jiàn)表2～4?！　”?L9(34)因素水平設(shè)計(jì)（略）　　2.3藥理效應(yīng)評(píng)價(jià)〔4〕由于提取所得的活性部位除生物堿外還含有非生物堿成分，這些成分對(duì)總生物堿藥效的影響并不清楚，所以若單純以化學(xué)指標(biāo)如生物堿產(chǎn)率的高低來(lái)優(yōu)選最佳提取工藝，其藥效是否最強(qiáng)仍未可知，由此，對(duì)這些提取浸膏做了進(jìn)一步的藥效篩選?！　?.3.1鎮(zhèn)咳效應(yīng)的篩選取體重(20±2)g小鼠，雌雄各半，隨機(jī)分組（n=10），各組i.g給藥1h后，將小鼠置于倒置的500ml燒杯內(nèi)，用1ml注射器吸取氨水0.15ml注入燒杯內(nèi)放的棉球中，觀察小鼠的咳

8、嗽潛伏期和3min內(nèi)咳嗽次數(shù)?！　?.3.2祛痰效應(yīng)的篩選分別配制標(biāo)準(zhǔn)濃度酚紅溶液，以分光光度計(jì)測(cè)定吸光度(A)，以A對(duì)酚紅含量C回歸，得回歸方程A=2.4909+0.053722C，r=0.9995。