精氨酸對急性胰腺炎大鼠胰腺腺泡細(xì)胞凋亡的影響論文

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1、精氨酸對急性胰腺炎大鼠胰腺腺泡細(xì)胞凋亡的影響論文【摘要】目的:探討左旋精氨酸與急性胰腺炎(AP)大鼠胰腺腺泡細(xì)胞凋亡的關(guān)系.方法:以蛙皮素制造AP模型，觀察不同劑量LArg治療AP大鼠后，胰腺組織中一氧化氮合酶（NOS）活性、一氧化氮(NO)的含量、胰腺腺泡細(xì)胞凋亡及胰腺組織病理改變.結(jié)果:AP胰腺組織中NOS活性較正常胰腺組織中升高，而此時胰腺組織NO濃度反而降低，低劑量LArg（75,150mg/kg）使胰腺組織中NO濃度升高致接近正常組水平，促進(jìn)了胰腺腺泡細(xì)胞凋亡，減輕胰腺病理損害；高LAr

2、g劑量（1200,2400mg/kg），胰腺組織中NO濃度升高超出正常組.freelg/kg體質(zhì)量治療組（D,E,F,.freela公司,左旋精氨酸(LARG)購自上海信誼制藥廠,經(jīng)生理鹽水稀釋為25%溶液后使用,原位凋亡檢測試劑盒(武漢博士德生物工程有限公司).1.2方法1.2.1模型制備與用藥所有實(shí)驗(yàn)動物術(shù)前12h禁食，自由飲水，稱取體質(zhì)量后，50g/L戊巴比妥（4mL/kg）肌肉注射麻醉.以腹腔內(nèi)注射蛙皮素50.0μg/kg,1次/h,連續(xù)2次,制造AEP模型,假手術(shù)組注射生理鹽水.4h后經(jīng)頸靜

3、脈注射LArg(上海信誼制藥廠批號990302，經(jīng)生理鹽水稀釋為25%溶液后使用).其后12h采取斷頸方法處死動物，剖腹取材.所取胰腺組織分成兩部分：一部分以40g/L甲醛固定，用于胰腺組織形態(tài)觀察，并用TUNEL方法檢測胰腺組織細(xì)胞凋亡；一部分制成勻漿，-20℃保存，用于測定胰腺組織ＮＯＳ活性、ＮＯ２－／ＮＯ３－濃度.1.2.2觀察指標(biāo)①采取相同部位的胰腺組織固定于40g/L甲醛溶液，常規(guī)方法制作病理切片，HE染色，光鏡下觀察.胰腺炎組胰腺組織呈炎性改變.對照組胰腺組織細(xì)胞正常.采用改良Gre.④取

4、胰腺組織２００ｍｇ，加入ＰＢＳ緩沖液（０.０２ｍｏｌ／Ｌ，ｐＨ７.４）勻漿至２ｍL，離心后取上清０.１ｍL，以酶法（南京建成生物制品研究所試劑盒），按說明書步驟測定ＮＯ２－／ＮＯ３－濃度，間接反映ＮＯ濃度.統(tǒng)計學(xué)處理:所有實(shí)驗(yàn)結(jié)果以x±s表示，組間比較采用SPSS8.0統(tǒng)計軟件作單因素方差分析及兩兩比較.P0.05認(rèn)為具有統(tǒng)計學(xué)意義.２結(jié)果2.1病理觀察正常組胰腺肉眼及光鏡下均未見明顯病理變化，AP組胰腺組織中炎癥細(xì)胞浸潤，腺細(xì)胞腫脹，點(diǎn)狀壞死，間質(zhì)水腫.胰腺組織光鏡下病理評分見表1.AP及各治療組中組

5、病理評分高于正常組（P0.05），其中D,E,F組明顯低于B組，而H,I組高于B組.表1胰腺組織光鏡下病理評分（略）2.2胰腺組織中NOS活性、ＮＯ２－／ＮＯ３－濃度、腺泡細(xì)胞凋亡AP及各治療組中組NOS活性高于正常組（P0.05），各組間NOS活性無統(tǒng)計學(xué)差異（P0.05）.B,C組ＮＯ２－／ＮＯ３－濃度明顯低于A組（P0.05），LArg治療組ＮＯ２－／ＮＯ３－濃度，均高于正常及AP組（P0.05），其中H,I組分別高于D,E組；AEP及各治療組中組凋亡指數(shù)高于正常組（P0.05），其中D,E,F

6、,G組AI高于B組，而H,I組AI低于B組（P0.05,表2）.表2各組胰腺組織中NOS水平、ＮＯ２－／ＮＯ３－濃度、腺泡細(xì)胞凋亡指數(shù)（略）3討論AP是普外科臨床的常見急腹癥之一,近年來發(fā)病率逐漸升高,臨床表現(xiàn)兇險,常合并器官功能障礙，病死率高，目前仍屬于難治性疾病之一.一般認(rèn)為,胰腺炎發(fā)生后出現(xiàn)的炎性細(xì)胞聚集和炎性介質(zhì)(即所謂“瀑布樣效應(yīng)”)是影響胰腺炎病情的主要因素.然而，最新的研究報告指出,胰腺炎發(fā)生時最早的病理變化出現(xiàn)在胰腺腺泡細(xì)胞內(nèi),腺泡細(xì)胞本身對損傷的反應(yīng)是決定“瀑布樣效應(yīng)”程度及病情輕重的

7、決定性因素之一.AP時，胰腺細(xì)胞受損，細(xì)胞存在凋亡和壞死兩種不同的死亡形式，其中腺泡細(xì)胞凋亡是機(jī)體的一種自我保護(hù)機(jī)制.AP時，受損的胰腺腺泡細(xì)胞發(fā)生死亡，如果以壞死方式進(jìn)行，細(xì)胞內(nèi)多種成分（多種酶原、細(xì)胞器等）釋放出來，會產(chǎn)生“瀑布樣效應(yīng)”，并伴隨劇烈的炎癥反應(yīng)，從而誘發(fā)急性重癥胰腺炎，致敏的中性粒細(xì)胞和大量的炎性介質(zhì)造成機(jī)體產(chǎn)生全身炎性反應(yīng)綜合征（SIRS）如不及時終止其發(fā)展，則可進(jìn)一步導(dǎo)致多臟器功能不全綜合征（MODS），甚至多臟器功能衰竭（MOF）.壞死細(xì)胞越多，則胰腺炎病情越重.如果受損的胰腺腺

8、泡細(xì)胞以凋亡方式進(jìn)行，細(xì)胞內(nèi)多種成分不外泄，形成凋亡小體，被巨噬細(xì)胞等吞噬周圍炎癥反應(yīng)輕，胰腺炎病情較輕［5］.本研究結(jié)果證明在凋亡指數(shù)低,胰腺病理損害較嚴(yán)重，如果能調(diào)控凋亡的強(qiáng)弱,有可能在急性胰腺炎的治療方面開辟一個新的領(lǐng)域.本研究表明，急性水腫性胰腺炎（AEP）時胰腺組織中NOS活性較正常胰腺組織中明顯升高，而此時胰腺組織NO濃度反而降低，提示胰腺組織NO濃度降低是由于作為NO惟一供體的LArg耗竭引起的.我們采用劑量呈倍數(shù)梯度增加的