體外藥物肝代謝研究進(jìn)展

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1、體外藥物肝代謝研究進(jìn)展　　0引言　　肝臟是藥物主要的和重要的代謝器官，是藥物生物轉(zhuǎn)化的主要場(chǎng)所，是富含參與藥物代謝的一個(gè)龐大的依賴(lài)細(xì)胞色素P450的混合功能氧化酶系統(tǒng)，大多數(shù)藥物的Ⅰ相和Ⅱ相代謝反應(yīng)都是在肝藥酶系統(tǒng)的參與下發(fā)生的，因此藥物的體外代謝模型主要是以肝臟為基礎(chǔ)的，并以其特有的優(yōu)勢(shì)和特點(diǎn)在藥物代謝的研究中得到廣泛的應(yīng)用.體外藥物的肝代謝研究已經(jīng)發(fā)展很長(zhǎng)時(shí)間，與體內(nèi)代謝研究相比，體外代謝研究有許多優(yōu)點(diǎn)，①體外代謝研究可以排除體內(nèi)諸多的干擾因素，直接觀察到代謝酶對(duì)底物的選擇性代謝，為體內(nèi)代謝研究提供重要的線(xiàn)索和依據(jù).②對(duì)于體內(nèi)代謝轉(zhuǎn)化率低且缺乏靈敏檢測(cè)手段的藥物來(lái)說(shuō)，

2、體外代謝不失為一種很好的研究手段.③體外代謝研究具有快速簡(jiǎn)便的特點(diǎn)，適合大量化合物的藥動(dòng)學(xué)篩選.④不需要消耗大量的樣品和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，因而研究費(fèi)用相對(duì)較低［1］.我們從體外肝代謝模型入手，綜述了近年來(lái)藥物體外肝代謝的文獻(xiàn).　　1肝微粒體體外溫孵法　　肝微粒體體外溫孵實(shí)驗(yàn)是采用從肝臟中提取的肝微粒體，并加入還原型輔酶II(NADPH)再生系統(tǒng)，在體外模擬生理環(huán)境下進(jìn)行代謝反應(yīng)，采用高效液相色譜(HPLC)、高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法(HPLCMS)等測(cè)定方法對(duì)原型藥及代謝產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)定的一種體外代謝的實(shí)驗(yàn)方法.　　1.1Ⅰ相代謝Ⅰ相代謝又稱(chēng)為官能團(tuán)反應(yīng)，包括氧化、還原、水解、水合等

3、反應(yīng).NADPH為還原型酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸，是許多藥物生物轉(zhuǎn)化反應(yīng)中不可缺少的輔助因子，它在這些反應(yīng)中起到還原劑的作用，體系中只要NADPH濃度達(dá)到1mmol/L時(shí)，便足以維持藥物代謝反應(yīng)進(jìn)行，但NADPH價(jià)格較高，且不易長(zhǎng)時(shí)間保存.因此常采用NADPH再生系統(tǒng)來(lái)代替NADPH.即利用相對(duì)穩(wěn)定和廉價(jià)的輔酶II(NADP)與6磷酸葡萄糖在6磷酸葡萄糖脫氫酶的作用下生成NADPH.　　6磷酸葡萄糖＋NADP6磷酸葡萄糖脫氫酶　　6－磷酸葡萄糖內(nèi)脂＋NADPH　　文獻(xiàn)［2］研究了吡喹酮在大鼠肝微粒體內(nèi)的代謝情況，發(fā)現(xiàn)在不同誘導(dǎo)劑對(duì)大鼠肝微粒體誘導(dǎo)后其羥基化代謝產(chǎn)物不

4、同.姚慶強(qiáng)等［3］則利用大鼠肝微粒體溫孵實(shí)驗(yàn)對(duì)黃皮酰胺的正反異構(gòu)體的代謝情況進(jìn)行了考察，并采用HPLCMS對(duì)其代謝產(chǎn)物進(jìn)行定性和定量，發(fā)現(xiàn)右旋和左旋的黃皮酰胺均代謝產(chǎn)生3去氫黃皮酰胺.姜敏等［4］應(yīng)用CYP3A特異性誘導(dǎo)劑地塞米松、CYP2B誘導(dǎo)劑苯巴比妥、CYP1A誘導(dǎo)劑β－萘黃酮分別對(duì)S進(jìn)行測(cè)定，同時(shí)測(cè)定其酶動(dòng)力學(xué).結(jié)果發(fā)現(xiàn)，對(duì)于短鏈脂肪醇來(lái)說(shuō)，不止一種Ⅱ相代謝酶催化其代謝反應(yīng).Rangaraj等［12］研究了氟派啶醇在大鼠肝微粒體的葡醛酸化反應(yīng)，并采用HPLC/MS/MS測(cè)定.結(jié)果表明，Ⅱ相代謝酶UGT2B12，UGT2B1為該藥物的主要催化酶.　　2肝細(xì)胞體外

5、溫孵法　　肝細(xì)胞體外孵育法與肝微粒體法相似，即以制備的肝細(xì)胞輔以氧化還原輔酶，在模擬生理環(huán)境條件下進(jìn)行代謝反應(yīng)的體系.培養(yǎng)體系中的肝細(xì)胞可以很好地模擬體內(nèi)肝臟的生理環(huán)境,在研究外源性化合物的生物活性、毒性、毒理機(jī)制、代謝命運(yùn)和致癌性檢測(cè)等方面有許多優(yōu)勢(shì),被認(rèn)為是藥物臨床前毒性檢測(cè)的可靠模型［13］.Born等［14］利用新鮮分離的鼠肝細(xì)胞檢測(cè)了香豆素的代謝產(chǎn)物,發(fā)現(xiàn)香豆素經(jīng)肝細(xì)胞代謝產(chǎn)生的香豆素環(huán)氧化物和該環(huán)氧化物的代謝產(chǎn)物0羥苯乙醛是引起肝毒性的主要原因.Yoshihiro等［15］利用新鮮分離的肝細(xì)胞考察了十幾種化合物的體外清除率,并與體內(nèi)血漿清除率比較,發(fā)現(xiàn)兩種方

6、法一致性較好,在藥物研發(fā)中有很好的應(yīng)用前景.曹?chē)?guó)穎等［16］考察了那格列奈在大鼠游離肝細(xì)胞中的代謝特點(diǎn)，結(jié)果表明CYP450同工酶CYP2D6和CYP2C9在那格列奈羥基化過(guò)程中起重要作用.　　3肝勻漿體外溫孵法　　上述采用的體外肝代謝都比較復(fù)雜，操作比較煩瑣，因此目前很多研究人員為了簡(jiǎn)化實(shí)驗(yàn)，直接采用將肝臟勻漿的辦法，將藥物加入到肝勻漿溶液中，考察其在肝勻漿液的代謝情況來(lái)說(shuō)明藥物在肝臟中的代謝情況.陳聰穎等［17］將槐苷在大鼠肝勻漿液中孵育，采用RPHPLC法測(cè)定槐苷及其代謝產(chǎn)物.研究表明，其主要代謝產(chǎn)物為苷元.李文蘭等［18］研究了鄰苯二甲酸丁基芐酯在不同性別小鼠肝

7、勻漿中的生物降解.結(jié)果表明，鄰苯二甲酸丁基芐酯在肝臟中代謝有明顯的性別差異.陳懷俠等［19］采用液相色譜－串聯(lián)質(zhì)譜法分析大鼠山莨菪堿肝勻漿代謝物.結(jié)果在大鼠肝勻漿培養(yǎng)液中發(fā)現(xiàn)了脫水山莨菪堿，說(shuō)明山莨菪堿在大鼠肝臟中可以被代謝.呂承等［20］將燈盞乙素與的家兔小腸內(nèi)容物、肝組織勻漿和血漿在37℃孵育.結(jié)果表明燈盞乙素體外不穩(wěn)定,在生物樣品中降解迅速,肝臟、血液、小腸等都是燈盞乙素可能的降解部位.林文輝等［21］研究了布洛芬離體肝代謝中對(duì)映體間的相互作用，發(fā)現(xiàn)在手性轉(zhuǎn)化代謝過(guò)程中存在對(duì)映體的相互作用,即S(+)－布洛芬可以抑制R(