天然水蛭素對實驗性肝纖維化大鼠肝臟結締組織生長因子 mrna表達的影響論文

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1、天然水蛭素對實驗性肝纖維化大鼠肝臟結締組織生長因子mRNA表達的影響論文賈彥牛英才張英博周麗董妙先【摘要】目的觀察水蛭素對肝纖維化大鼠肝臟組織結締組織生長因子（ConnectivetissuegroRNA表達的影響。方法SD大鼠60只隨機分為空白對照組、模型組和水蛭素組共3組，每組20只，用40%四氯化碳（carbontetrachloride,CCl4）復制大鼠肝纖維化模型，水蛭素干預12周后處死大鼠，采用實時熒光定量PCR法檢測大鼠肝組織CTGFmRNA的表達。結果模型組CTGFmRNA2-ΔΔCt值（3.59±0.52）顯著高于正常對照組（1.02±0.23）(P0.05)，表明模型

2、組CTGFmRNA表達上調(diào)。與模型組比較，水蛭素組CTGFmRNA2-ΔΔCt值（1.83±0.34）顯著降低（P0.05），表明CTGFmRNA表達下調(diào)。結論水蛭素可能通過下調(diào)CTGFmRNA的表達.freelRNAexpressioninratliverinhepaticfibrogenesisinducedbycarbontetrachloride(CCl4).MethodsStudiesaleSprague-Dalydividedinto3groupsedasblankcontrolsgroup,modelgroup,andhirudingroup.Ahepaticfibrosis

3、modelonratsalsalineodelgrouprats.After12RNAexpressioninhepatictissueequantitativereversetranscription-PCR.ResultsTheCTGFmRNAexpressionodelgroups,inRNA2-ΔΔCtvalueRNAexpressioninhirudingroup(1.83±0.34)odelgroup(P0.05).ConclusionHirudinmaydoRNAandInhibittheabnormalhyperplasiaofhepaticextracellularmat

4、rix,soithasthefunctionofantihepaticfibrosis.Keyequantitativereversetranscription-PCR肝纖維化是大多數(shù)慢性肝病向肝硬化發(fā)展的共同病理過程，成因相當復雜，阻斷肝纖維化的繼續(xù)發(fā)展，是預防肝硬化的關鍵［1］。肝纖維化的特征是肝細胞增殖和細胞外基質(zhì)聚集，并需轉(zhuǎn)化生長因子-β1（TGF-β1）參與，CTGF是TGF-β1的下游效應介質(zhì)，具有介導TGF-β1促細胞外基質(zhì)沉積的作用，阻斷CTGF可抑制TGF-β介導的細胞外基質(zhì)（Extracellularmatrix,ECM）產(chǎn)生［2］。多數(shù)中醫(yī)醫(yī)家認為肝血瘀阻是肝纖維化基

5、本病機，因此用藥以活血化瘀為主。水蛭是經(jīng)典的破血逐瘀類中藥。作者利用SYBRGreenⅠ實時定量RT-PCR技術，建立大鼠肝組織CTGF基因相對表達量的檢測方法，觀察了水蛭素干預對CCl4誘導的大鼠肝纖維化肝臟組織中的CTGF基因的影響。1材料與儀器1.1藥物水蛭素的提?。?］：先將寬體金線蛭干制品粉碎，然后加入10倍體積的80%預冷丙酮，4℃攪拌10min，再加入氯化鈉和三氯乙酸，攪拌30min，然后離心，棄上清液，沉淀中加入其體積1/3的80%冷丙酮，抽提2次，離心，收集上清液，合并兩次抽提液加入2倍體積的冷丙酮，靜置2h，再離心，棄上清液，收集沉淀，干燥得水蛭素粗品。四氯化碳（CCl

6、4分析純）：北京北化精細化學品有限責任公司。1.2動物及分組選用健康雄性清潔級SD大鼠60只，體重（200±10）g，由北京維通利華實驗動物技術有限公司提供，許可證編號SCXK（京）2002-0003。經(jīng)適應性飼養(yǎng)1周，隨機分為空白對照組、模型對照組和水蛭素組共3組。1.3試劑和儀器SYBRExScriptTMRT-PCRkit（PerfectRealTime）為TAKARA公司產(chǎn)品，2700型PCRSystem擴增儀為AppliedBiosystems公司產(chǎn)品，UV-2550型紫外分光光度計為日本島津產(chǎn)品，ABI7300熒光定量PCR儀為美國ABI公司產(chǎn)品。2方法2.1肝纖維化模型的建

7、立［4］和藥物干預大鼠皮下注射體積比為40%的CCl4和橄欖油混合液0.2ml/100g，每周2次，連續(xù)12周。正常組用等量生理鹽水皮下注射，水蛭素組在造模同時按60mg·kg-1，1次/d，灌胃給藥，連續(xù)12周，正常組和模型組給予等體積蒸餾水灌胃，治療結束后第2天，剖取動物肝臟。2.2熒光實時定量PCR檢測大鼠肝臟組織CTGFmRNA表達2.2.1抽提總RNA實驗結束時（12周末）在戊巴比妥鈉麻醉條件下隨機每組取5只大