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《花椒體內(nèi)外抗腫瘤作用及其機(jī)制的初步研究論文》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、花椒體內(nèi)外抗腫瘤作用及其機(jī)制的初步研究論文袁太寧,王艷林,汪鋆植【摘要】目的研究花椒揮發(fā)油體內(nèi)外抗小鼠H22肝癌細(xì)胞作用及其免疫學(xué)機(jī)制。方法花椒揮發(fā)油按不同時間（24，48，72h）及不同濃度（0.5～8mg/ml）分別處理H22細(xì)胞，MTS法分析細(xì)胞的增殖速度，用流式細(xì)胞儀測定細(xì)胞凋亡及細(xì)胞周期。建立H22荷瘤小鼠模型，觀察小鼠腫瘤的生長情況,計算腫瘤生長抑制率；ELISA法檢測花椒揮發(fā)油處理后小鼠血清中IL-2和IL-12的活性。結(jié)果4mg/ml花椒揮發(fā)油處理H22細(xì)胞72h可顯著地抑制H22細(xì)胞增殖，1mg/ml花椒揮發(fā)油處理H22細(xì)胞72h即可導(dǎo)致亞凋亡峰的出
2、現(xiàn)，且G0/G1期細(xì)胞增多,S期和G2/M期細(xì)胞減少.freelereffectanditsimmunologicalmechanismoftheessentialoilofzanthoxyluminvivoandinvitro.MethodsTreatingH22cellsatdifferenttimeand,MTSetryormodesoreffectofzanthoxylumorgroIL-2andIL-12inedbyELISAassay.ResultsTreatingH22cells72hby4mg/mlessentialoilofzanthoxylumre
3、sultedinremarkableinhibitionofthecellproliferation.TreatingH22cells72hby1mg/mlessentialoilofzanthoxylumresultedinappearanceofsub-G1andincreaseG0/G1phasecellsanddecreaseSphaseandG2/Mphasecells.Theessentialoilofzanthoxyluminhibitedthegroorintumor-bearingmice.Hocouldnotincreasethecontentso
4、fmurineserumIL-2andIL-12.ConclusionTheessentialoilofzanthoxyluminhibitsproliferationandinducescellapoptosisofH22cells,butitcannotexerttheanti-tumorefficiencythroughreinforcingtheimmunefunction.Key;H22cells;Apoptosis;Immunefunction花椒屬一種溫?zé)犷愔胁菟帲?熱,有小毒，歸脾、腎兩經(jīng),功能溫中止痛,解毒殺蟲，常用于治療脾胃虛寒癥?；ń愤€是深受民
5、眾喜愛的重要食用性香料，其資源在我國分布很廣,.freelbungeanum。H22腹水型小鼠肝癌細(xì)胞由本院保存，清潔級BALB/C小鼠由同濟(jì)醫(yī)科大學(xué)動物中心提供。MTS細(xì)胞增殖分析試劑由Promega公司提供。EPLCSXL流式細(xì)胞分析儀為BecmanCoulter公司產(chǎn)品,全波長酶標(biāo)儀為為Thermo公司產(chǎn)品，R206D旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器為上海申生科技有限公司產(chǎn)品。2方法2.1花椒揮發(fā)油制備使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器提取花椒果皮揮發(fā)油并過濾除菌，稱取適量揮發(fā)油加入5%Tin，用RMPI1640無血清培養(yǎng)基或生理鹽水稀釋成所需要的濃度。2.2細(xì)胞增殖分析將對數(shù)生長期的H22細(xì)胞以4×1
6、07/L細(xì)胞數(shù)接種于圓底96孔培養(yǎng)板,每孔50μl。37℃培養(yǎng)24h后,向孔內(nèi)直接加入含不同濃度（8，4，2，1，0.5mg/ml）花椒揮發(fā)油的RPMI1640培養(yǎng)基50μl。在加入藥物后選定的時間點(diǎn)(24，48，72h),向每孔中加入20μlMTS試劑,37℃繼續(xù)保溫2h顯色,于490nm波長下讀取OD值。細(xì)胞生存率（％）=OD藥物/OD對照×100％；細(xì)胞生長抑制率（％）=(1-細(xì)胞生存率)×100%2.3流式細(xì)胞儀測定細(xì)胞凋亡及細(xì)胞周期取1×106對照細(xì)胞或經(jīng)不同濃度（8，4，2，1，0.5mg/ml）花椒揮發(fā)油處理的細(xì)胞,用冰冷PBS洗滌1次后,再懸浮于500
7、μl低滲DNA染色液中(1g/LSodiumCitrate,0.1%TritonX100,100mg/LRNase,50mg/LPropidiumIodode),4℃保溫30min后,經(jīng)流式細(xì)胞儀分析凋亡細(xì)胞及細(xì)胞周期時相分布，計算細(xì)胞增殖指數(shù)（PI）。PI=（S+G2/M）÷(G1+S+G2/M)×100%2.4花椒揮發(fā)油對H22荷瘤小鼠移植瘤生長的影響取對數(shù)生長期H22細(xì)胞,以RPMI1640調(diào)整細(xì)胞濃度為5×106/ml,于BALB/c小鼠左側(cè)下腹部行無菌皮下接種0.2ml細(xì)胞懸液。接種24h后將BALB/c小鼠隨機(jī)分為5組,給藥劑量分別為10
