大果木姜子不同組方提取物體外抗菌試驗探究

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1、大果木姜子不同組方提取物體外抗菌試驗探究【摘要】目的:以體外藥物的抗菌強度為測評指標,把以大果木姜子精油為主藥與其他抗菌藥物組成的Ⅰ號、Ⅱ號、Ⅲ號三個處方進行優(yōu)選,確定最佳的處方組成和提取方法。方法:采用瓊脂擴散管碟法定性、試管法定量對三個處方水提物及醇提物的體外抗菌強度進行測定比較。結果:Ⅲ號處方的醇提液具有較好的體外殺菌作用?！娟P鍵詞】大果木姜子;不同組方;體外抗菌試驗【中圖分類號】R285.5【文獻標識碼】A【文章編號】1007-8517(2010)18-042-2大果木姜子(CinnamomummigaoH.W.Li)系樟科樟屬植物米槁的干燥果實,

2、是貴州十大苗藥之一。根據有關文獻資料[1～8]及其預試驗的情況,證明大果木姜子精油為其主要成分,具有明顯的體外體內抗菌、抗病毒、殺蟲等功效。為更好地發(fā)揮其體外抗菌的療效,我們結合現代藥理的結果,以大果木姜子精油為主藥與其他抗菌藥物組成的Ⅰ號、Ⅱ號、Ⅲ號三個處方,采用水提、醇提兩種工藝對其體外抗菌強度進行了測定?，F將試驗結果報告如下。1試驗藥物的制備及使用的設備6配方以大果木姜子精油為主,分別配伍:珊瑚姜;杠板歸;飛龍掌血;苦參;土荊皮;蛇床子;花椒等藥物的提取物組成Ⅰ～Ⅲ號方,分別采用醇提和水提工藝制備出①～⑥號試驗藥物。①③⑤號試驗藥物:取十分之一量Ⅰ～

3、Ⅲ號處方,分別用70%的乙醇加熱回流提取兩次,第一次加醇6倍量,提取1小時;第二次加醇6倍量,提取1小時,提取液合并,揮至無醇味,過濾,用蒸餾水定容至100ml(即每毫升藥液中含生藥材0.4g),靜置24小時,過濾;另取大果木姜子精油1g加入0.5%吐溫-80(即0.5g)增溶劑,超生5min混勻,混合液2000r/min離心10min,取上清夜,備用。②④⑥號試驗藥物制備:取十分之一量Ⅰ～Ⅲ號方,用水煎煮兩次,第一次加水10倍量,煎煮1小時;第二次加水8倍量,煎煮1小時,煎液合并,濃縮定容至100ml(即每毫升藥液中含生藥材0.4g)靜置24小時,過濾;

4、另取大果木姜子精油1g加入0.5%吐溫-80(即0.5g)增溶劑,加入水提取液中超生5min混勻,混合液2000r/min離心10min,取上清夜,備用。通過以上工藝制備六個試驗制劑樣品,用0.22μm的微孔濾膜過濾除菌,放于4℃冰箱中,備用。注:各處方十分之一量為40g生藥,其中大果木姜子按出油率為20%計算。2菌種及培養(yǎng)基62.1試驗菌種金黃色葡萄球菌、乙型溶血性鏈球菌、白色葡萄球菌、致病性大腸桿菌、綠膿桿菌、絮狀表皮癬菌、黃曲霉菌、白色念珠菌。(均來自貴陽中醫(yī)學院微生物教研室)2.2培養(yǎng)基本試驗采用普通牛肉湯培養(yǎng)基、普通營養(yǎng)瓊脂、血瓊脂平板、虎紅培養(yǎng)

5、基、沙氏液體培養(yǎng)基、沙氏瓊脂等。3試驗方法3.1細菌的處理方法3.1.1細菌將菌種接種于普通瓊脂斜面培養(yǎng)基上,置恒溫培養(yǎng)箱37℃培養(yǎng)48h,再接種于肉湯培養(yǎng)基,于37℃培養(yǎng)6-8h,然后作1:1000稀釋備用。3.1.2真菌用72小時培養(yǎng)物洗脫的真菌孢子懸液調整濃度為5×105個/ml備用。3.2抗菌強度定性試驗按抗生素的效價測定(管碟法)操作,取無菌培養(yǎng)皿(直徑90mm,高18mm大小一致,皿底平坦)20套,每皿加入融化的15ml普通瓊脂培養(yǎng)基作為底層,凝固。將融化并冷卻至50-60℃的普通瓊脂培養(yǎng)基100ml加入50%葡萄糖液1ml和菌液2ml充分混勻

6、,立即取5ml均勻平鋪在已凝固的底層培6養(yǎng)基上,凝固成上層培養(yǎng)基。每個培養(yǎng)皿塊等距離按置3個已滅菌牛津杯,取已滅菌槍頭用微量移液槍將100u1各處方提取液加入到牛津杯中,置37℃恒溫箱培養(yǎng)24h,用游標卡尺測量其抑菌圈直徑。生理鹽水做陰性對照。3.3抗菌強度定量試驗本試驗采用試管法定量測定藥物的抗菌強度。每一菌株取干凈試管10支,于第1管加入上述100%濃度藥液和相應培養(yǎng)液1毫升,第2管至第8管各加入相應培養(yǎng)液1毫升。將第1管中藥液混勻后沿2～8管做等倍稀釋,至第8管混勻后吸取1毫升棄去,由此得到1:2、1:4、1:8……1:256的稀釋度。第9管只加稀釋

7、菌液或孢子懸液1.05毫升作陽性對照,第10管只加相應培養(yǎng)液1.05毫升作陰性對照。分別吸取稀釋菌液或孢子懸液0.05毫升加入第1管至第8管,混勻。細菌:以無藥MH肉湯培養(yǎng)基接種相同菌種作為對照,于37℃恒溫箱培養(yǎng)24h后,以有無菌生長為判斷標準,與對照組(菌落生長正常)比較,有肉眼可見菌落生長者為無抑菌作用,無菌落生長者的藥物最低濃度為藥物的(MIC);真菌:以無藥沙氏液體培養(yǎng)基接種相同菌種作為對照,于25℃恒溫箱培養(yǎng)72h后,以有無菌生長為判斷標準,與對照組(菌落生長正常)比較,有肉眼可見菌落生長者為無抑菌作用,無菌落生長者的藥物最低濃度為藥物的(MI

8、C)。每個濃度的藥物抑菌試驗重復3次,抑菌結果為3次試驗平均值。6