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《非小細(xì)胞性肺癌病人相關(guān)細(xì)胞因子的表達(dá)論文》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、非小細(xì)胞性肺癌病人相關(guān)細(xì)胞因子的表達(dá)論文【摘要】目的探討非小細(xì)胞性肺癌（NSCLC）病人局部微環(huán)境中免疫反應(yīng)特點(diǎn)及其對抗腫瘤免疫的影響。方法以5例結(jié)核性胸膜炎病人作為對照,采用地高辛末端標(biāo)記的寡核苷酸探針,以原位雜交技術(shù)檢測了23例NSCLC病人的新鮮胸腔積液和(或)手術(shù)切除標(biāo)本淋巴細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞中IL-2、INF-γ、IL-4、IL-10、TGF-β1、IL-1、IL-3、IL-8、GM-CSF、TNF-α及TGF-αmRNA的表達(dá)。結(jié)果病人胸腔積液的單個核細(xì)胞及腫瘤組織中,IL-4、IL-10、TGF-α和TGF-β1m
2、RNA的表達(dá)水平明顯高于IL-2、IL-12、IL-18、INF-γ；而結(jié)核性胸腔積液的單個核細(xì)胞中上述細(xì)胞因子的水平均降低,并且各細(xì)胞因子的表達(dá)水平之間沒有明顯的差異。結(jié)論NSCLC病人胸腔積液的單個核細(xì)胞及腫瘤組織中,Ⅱ型細(xì)胞因子和免疫抑制細(xì)胞因子mRNA的表達(dá)占主導(dǎo)地位,反映了腫瘤局部的免疫微環(huán)境處于抑制狀態(tài)。上述結(jié)果有助于了解腫瘤逃逸的機(jī)制,并為制定NSCLC免疫治療的方案提供了重要的實(shí)驗(yàn)依據(jù)?！娟P(guān)鍵詞】癌非小細(xì)胞肺細(xì)胞因子類原位雜交［ABSTRACT］ObjectiveToexplorethecharacteris
3、ticsofimmuneresponsesinthemicroenvironmentofnon-smallcelllungcancer(NSCLC).MethodsInsituhybridization(ISH)RNAexpressionsofcytokinesinfreshpleuraleffusionsamplesandtumortissuesamplesof23NSCLCpatients.Fivetuberculouspleurisypatientsservedascontrols.ResultsThemRNAexpr
4、essionofIL-4,IL-10,TGF-αandTGF-β1intumortissueandmononuclearcellsfrompleuraleffusionofNSCLCpatientsRNAexpressionofIL-4,.freelplesRNAexpressionamongdifferentsamplesoftuberculouspleurisypatients.ConclusionThemRNAexpressionsoftypeⅡcytokinesandimmunosuppressivecytokine
5、spredominatedinthepleuraleffusionandtumortissueofNSCLCpatients,suggestinganimmunosuppressivemicroenvironmentaroundthetumor.Theresultscontributetoabetterunderstandingofthemechanismsoftumorescapeandprovideanimportantexperimentalbasisforeforaneffectiveimmunomodulatory
6、treatmentofNSCLCpatients.［KEY-CSF：5′-CAAACATTTCTGAGATGACTTCTACTG-3′；TNF-α：5′-AACTTTATTTCTCGCCACTGAATAGTA-3′。將13種細(xì)胞因子分為5組:IL-2、IFN-γ、IL-12和IL-18為Th1型細(xì)胞因子；IL-4和IL-10為Th2型細(xì)胞因子；TGF-β1為免疫抑制細(xì)胞因子；IL-1、IL-3、IL-8為致炎細(xì)胞因子的代表；TGF-α、TNF-α和GM-CSF。采用地高辛(DIG)寡核苷酸末端標(biāo)記試劑盒標(biāo)記探針,標(biāo)記過程嚴(yán)格
7、按照產(chǎn)品說明書進(jìn)行，標(biāo)記的探針活性為1.56nmol/L。1.2.2細(xì)胞因子的原位雜交細(xì)胞涂片和組織石蠟切片的制備：整個操作過程均在無酶的環(huán)境中按常規(guī)操作進(jìn)行。組織切片經(jīng)脫蠟、消化和固定,并經(jīng)梯度乙醇脫水后，室溫干燥，于42℃先加預(yù)雜交液10~30mL在盒內(nèi)預(yù)雜交2h，然后加雜交液10~30μL，在42℃雜交22h。以梯度標(biāo)準(zhǔn)枸櫞酸鹽水(SSC)充分洗滌后，加抗體于37℃作用2h，再以NBT-BCIP顯色18h。用BufferⅢ作用5min終止顯色反應(yīng).freelin，依次進(jìn)行流水沖洗、梯度乙醇脫水、二甲苯透明及封片后鏡檢。
8、對照設(shè)置：將探針和抗體用PBS取代或?qū)⑶衅?7℃RNaseA(20mg/L)處理3min,分別作為細(xì)胞涂片和石蠟切片的陰性對照；以正常人活化的外周血淋巴細(xì)胞中的IL-2和INF-γmRNA作為細(xì)胞涂片的陽性對照；以慢性扁桃體炎組織中IL-2和INF-γmRNA的表達(dá)作為石蠟切片的陽性對照
