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《豬瘟病毒和牛病毒性腹瀉病毒雙重rt-pcr方法的建立和初步應(yīng)用》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫。
1、豬瘟病毒和牛病毒性腹瀉病毒雙重RT-PCR方法的建立和初步應(yīng)用?94?生物技術(shù)中國畜牧獸醫(yī)2011年第38卷第6期豬瘟病毒和牛病毒性腹瀉病毒雙重RT—PCR方法的建立和初步應(yīng)用陳靜.張小飛,范紅結(jié).,黃顯明(1.南京天邦生物科技有限公司,江蘇南京211102;2.南京農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院,江蘇南京210095)摘要:根據(jù)GenBank上已發(fā)表的豬瘟病毒(CSFV)和牛病毒性腹瀉病毒(BVDV)的全基因序列,進(jìn)行對比分析,分別設(shè)計(jì)合成兩對能特異性擴(kuò)增CSFV,BVDV的引物.經(jīng)過條件優(yōu)化后,建立了檢測CSFV和
2、BVDV的雙重RT—PCR方法,擴(kuò)增兩種病毒的片段,大小分別為938,650bp.應(yīng)用該方法對11批牛睪丸細(xì)胞,7批胎牛血清,6O個(gè)ItE次的豬瘟細(xì)胞苗,10份全血樣及10份組織樣進(jìn)行檢測.通過試驗(yàn)證明,所建立的方法具有良好的特異性和敏感性,為防止豬瘟細(xì)胞苗的污染及進(jìn)行CSFV和BVDV鑒別診斷提供了有效方法.關(guān)鍵詞:CSFV;BVDV;RTPCR;檢測中圖分類號:$858.28文獻(xiàn)標(biāo)識碼:A文章編號:16717236(2011)06009404豬瘟(classicalswinefever,CSF)是由豬瘟病
3、毒員,BVDV不僅可以感染牛,還可以感染豬,引起的(csFV)引起的一種高度接觸性烈性傳染病.豬不臨床癥狀和病理變化與豬瘟相似(Paton等,1994).分年齡,性別和品種均易感染,一年四季均可發(fā)生.BVDV與CSFV的核苷酸同源性約為6O,氨基酸中國每年因豬瘟造成的經(jīng)濟(jì)損失達(dá)數(shù)十億,目前針同源性約為85(謝西鋒等,2001),在血清學(xué)上存對豬瘟的主要治療措施是疫苗免疫接種.在交叉反應(yīng)(Thiel等,1991),因而血清學(xué)方法難以牛病毒性腹瀉病毒(bovineviraldiarrheavi一區(qū)分,用常規(guī)的病原
4、檢測方法難以對BVDV和CSrus,BVDV)與CSFV均屬黃病毒科,瘟病毒屬成FV進(jìn)行鑒別檢測和診斷.——豬瘟細(xì)胞苗的生產(chǎn)需要牛睪丸細(xì)胞(NBTE)和收稿日期:201011_17胎牛血清來繁殖豬瘟病毒,如果NTBE或胎牛血清作者簡介:陳靜(1982--),女,江蘇人,碩士生,研究方向:獸醫(yī)微中含有BVDV,則有可能將BVDV這種外源病毒帶……..J土三.………入豬瘟細(xì)胞苗中,造成豬瘟細(xì)胞苗的污染.另外通信作者:張小飛,男,研究員,碩士生導(dǎo)師.Email:xiaofei0804…………'～'…一一..…'''
5、'國…用含BVDV抗體的胎牛血清也會(huì)干擾豬瘟病毒的12ToyamaH,NishibayashiE,SaekiM,eta1.FactorsrequiredforthecatalyticreactionofPqqC/Dwhichproducespyrrol.quino¨nequinone[J~.BiochemBiophysResCommon,2007,354(1):29O～295.PreparationofRabbitAnti--gooseIgG?_HRPandPreliminaryApplicationLIUF
6、ei～,TANGWei—jie,HANQing—lin,ZHA()Ting—ting,GAOLi—qin,YANXiao—ling(1.CollegeofVeterinaryMedicine,SichuanAgriculturalUniversity,Ya'an625014,China;2.KeyLaboratoryofAnimalDiseaseandHumanHealthofSichuanProvince,Ya'an625014,China;3.BureauofAnimalHusbandryofDaying
7、,SichuanProvince,Daying629300,China)Abstract:TostudyonpreparationofrabbitantigooseIgG—HRP,theexperimentationisolatedIgGfromthegooseeggyolk,andthemethodwasemployedtOdilutewithwatern—octylicacid—ammoniasulfateinitialextraction,outsaltdialysisandDEAEA50chromat
8、ography.ProteinnucleicaciddetectorandSDS-PAGEindicatedthelgGconcentration;thepurifiedIgGwaslabeledwithHRP:effectofGPVVP3genevaccinewasdetectedwiththelabeledantibody.Theresultsindicatedthattheinitialext
