復(fù)葉槭葉片和莖段誘導(dǎo)愈傷組織的影響因素

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1、復(fù)葉槭葉片和莖段誘導(dǎo)愈傷組織的影響因素?生物技術(shù)?北方園藝2006(4):168～170復(fù)葉槭葉片和莖段誘導(dǎo)愈傷組織的影響因素張彥妮,卓麗環(huán).(1.東北林業(yè)大學(xué)園林學(xué)院哈爾濱,150040l2.上海農(nóng)林職業(yè)技術(shù)學(xué)院,201600)摘要:研究了影響復(fù)葉槭葉片和莖段愈傷組織誘導(dǎo)的因素.結(jié)果表明,放置方式與莖段和葉片的出愈率關(guān)系不大,但對(duì)莖段愈傷組織的大小,形態(tài)特性和部位與生根率有關(guān).葉片的出愈率與碳源有關(guān),在白沙糖中最高,蔗糖次之,但在蔗糖中表現(xiàn)最佳.黑暗處理時(shí)間的長(zhǎng)短也影響葉片的脫分化能力.葉片和莖段的脫分化能力與蔗糖濃度有關(guān),在30g/L時(shí)出愈率最大.外植體出愈率的高低和愈傷組織的形態(tài)

2、與激素種類或濃度有關(guān).高濃度的2,4一D將導(dǎo)致水漬狀或玻璃化的愈傷組織產(chǎn)生,低濃度的2,4一D形成瘤狀愈傷組織.隨著6一BA濃度的增加,葉片的生根率降低,莖段愈傷組織出現(xiàn)的時(shí)間提前,愈傷組織生長(zhǎng)的較快,但當(dāng)6一BA濃度到達(dá)2.0mg/L時(shí),愈傷組織出現(xiàn)時(shí)間推遲,生長(zhǎng)速度下降,褐化速度加快.關(guān)鍵詞:葉片;莖段I愈傷組織中圖分類號(hào):$792.35.04文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:B文章編號(hào):1001—0009(2006)04--0168一O3復(fù)葉械(AcernegundoL.)亦稱糖械,羽葉械,白蠟械,屬槭樹(shù)科,械樹(shù)屬.廣泛分布于美國(guó)及加拿大.該樹(shù)種喜光,耐早,耐寒,耐煙塵,根萌蘗性強(qiáng),生長(zhǎng)較快,對(duì)土壤要

3、求不嚴(yán);樹(shù)形挺拔秀美,入秋葉色金黃,具有很高的觀賞價(jià)值及實(shí)用價(jià)值,是稀有優(yōu)良的園林綠化樹(shù)種,可作庭院樹(shù),行道樹(shù)及防護(hù)林樹(shù)種.但目前的栽培苗木供不應(yīng)求,一般情況下,主要采用常規(guī)的扦插和播種繁殖方法,扦插繁殖系數(shù)低,播種繁殖的后代易產(chǎn)生性狀分離,而組織培養(yǎng)作為重要的快速繁殖技術(shù)可以彌補(bǔ)二者的缺點(diǎn).其中愈傷組織途徑是進(jìn)行組織培養(yǎng)快速繁殖的一條重要途徑.現(xiàn)以復(fù)葉械葉片和莖段為研究對(duì)象,通過(guò)比較不同處理方法以及不同濃度的2,4一D,6一BA等因素對(duì)復(fù)葉械葉片和莖段愈傷組織誘導(dǎo)的效果.從而為通過(guò)愈傷組織途徑建立復(fù)葉械組織培養(yǎng)再生體系奠定基礎(chǔ).1材料與方法1.1試驗(yàn)材料試驗(yàn)所用材料來(lái)源于復(fù)葉械的實(shí)生

4、苗和復(fù)葉械組培苗.1.2試驗(yàn)方法1.z.1復(fù)葉械實(shí)生苗莖段的消毒將來(lái)自35d左右的復(fù)葉械實(shí)生苗莖段,在加有1～2滴Tween一2O和1的NaClO溶液中進(jìn)行表面消毒,20d后進(jìn)行污染率,白化率統(tǒng)計(jì),從而篩選莖段的最佳消毒時(shí)間.1.2.2不同放置方式誘導(dǎo)莖段,葉片的愈傷組織將莖段平放或豎放(分為正插和倒插兩種),葉片近軸面或遠(yuǎn)軸面分別放于MS+0.01rag/L2,4一D+1.0mg/LBA的培養(yǎng)基上,2od后觀察記錄,比較放置方式對(duì)莖段和葉片愈傷組織誘導(dǎo)的影響.1.2.3不同碳源誘導(dǎo)葉片愈傷組織以組培苗的葉片為外植體,以MS+0.7mg/LBA+0.01mg/L2,4一D為培養(yǎng)基,分別

5、以葡萄糖,白沙糖,蔗糖為碳源(濃度均為3Og/L),20d后觀察記錄,比較不同碳源對(duì)葉片愈傷組織的誘導(dǎo)效果.1.2.4不同黑暗處理時(shí)問(wèn)誘導(dǎo)葉片愈傷組織以組培苗的葉片為外植體,將其接種到MS+0.7mg/LBA+0.01mg/L2,4一D培養(yǎng)基上,然后放于培養(yǎng)室進(jìn)行不同時(shí)間的黑暗處理(O,7d和15d),20d后進(jìn)行觀察記錄,比較黑收稿日期tz006一O3一zO168暗處理時(shí)問(wèn)對(duì)葉片愈傷組織的誘導(dǎo)效果.1.2.5不同蔗糖濃度誘導(dǎo)葉片,莖段愈傷組織以組培苗的葉片,莖段為外植體,以MS+0.7mg/LBA+0.01mg/L2,4一D為培養(yǎng)基,分別以10g/L,20g/L,30g/L,40g/

6、L蔗糖為糖源,比較蔗糖濃度對(duì)葉片,莖段愈傷組織的誘導(dǎo)效果,20d后進(jìn)行統(tǒng)計(jì).1.2.62,4一D和6一BA誘導(dǎo)葉片和莖段愈傷組織誘導(dǎo)愈傷組織培養(yǎng)基為:MS+O～1mg/L2,4一D;MS+0.01～2.5mg/L6一BAI所有培養(yǎng)基均用1NaOH調(diào)節(jié)pH為5.6～6.0,除了比較不同碳源和蔗糖濃度對(duì)外植體的分化影響外,均選用30g/L的蔗糖為碳源,瓊脂濃度為7.6g/L.然后在121℃條件下高壓滅菌13rain.1.2.7不同指標(biāo)的計(jì)算方法每隔一周觀察一次,20~30d統(tǒng)計(jì)出愈率,污染率,生根率等.計(jì)算公式如下:出愈率一[產(chǎn)生愈傷組織的外植體總數(shù)/(接種外植體總數(shù)一污染外植體總數(shù))]×

7、100污染率一[未污染的外植體總數(shù)/接種外植體總數(shù)]×100生根率一[生根外植體的總數(shù)/(接種外植體總數(shù)一污染外植體總數(shù))]×100外植體接種后,除進(jìn)行黑暗實(shí)驗(yàn)的比較外,均放入培養(yǎng)室內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng),培養(yǎng)室溫度為25士2℃,光/暗周期為14h/10h,光照強(qiáng)度250o～3500Lx.2結(jié)果與分析2.1莖段消毒時(shí)間的確定表1莖段不同消毒時(shí)間的比較從表1看出,莖段的放置方式影響其消毒效果.隨著莖段消毒時(shí)間的延長(zhǎng),污染率下降.莖段在消毒時(shí)問(wèn)超過(guò)10rain