青蒿葉片愈傷組織的誘導和植株再生

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1、青蒿葉片愈傷組織的誘導和植株再生作者：伍曉麗，劉飛，李隆云，鐘國躍【摘要】目的探討以青蒿幼嫩葉片再生植株的方法。方法以青蒿幼嫩葉片為外植體，接種于附加不同激素組合的MS培養(yǎng)基，進行愈傷組織誘導和植株再生。結果以6BA0.1mg/L+2，4-D0.3mg/L誘導愈傷組織，在含6BA0.1mg/L+IAA0.3mg/L的培養(yǎng)基上分化，用含IAA0.1mg/L+NAA0.3mg/L的培養(yǎng)基生根。結論用以上方法可以在較短周期內(nèi)從幼嫩葉片得到再生青蒿植株?！　　娟P鍵詞】青蒿；植物激素；愈傷；再生　　Abstrac

2、t：ObjectiveToexploretheleavesofArtemisiaannuaL..MethodsToplanttheleavesofArtemisiaannuaL.onmediumsplusdifferentplanthormones.ResultsThesuitablecallus-inducingmediumg/L+2,4D0.3mg/L.Thesuitableregeneratingmediumg/L+IAA0.3mg/L.Thesuitablerootinducingmediumg

3、/L+NAA0.3mg/L.ConclusionYoungplantscanregeneratefromleavesinashortspanbythemethodabove.　　KeyisiaannuaL；Planthormones；Callus；Regeneration青蒿(Artemisiaannua)L．，又名黃花蒿，是菊科一年生藥用草本植物。提取物青蒿素對腦瘧疾和氯喹瘧疾具有高效低毒的抗瘧性能，g/L+NAA1.0mg/L　　1.2.2外植體處理　　　剪取20cm高青蒿苗上的幼嫩葉片，剪成0.5cm

4、2的小塊，無菌水中浸泡3h，75%乙醇漂洗1min，于5%次氯酸鈉溶液中浸泡3min，無菌水漂洗4次，接種。培養(yǎng)條件為25℃，2000Lx光照、14h/d。　　2結果與分析觀察發(fā)現(xiàn)，不同激素組合對青蒿的愈傷誘導、植株再生和生根均有顯著影響。　　2.1愈傷組織誘導　　　接種后的葉片呈灰綠色水浸狀，貌似死亡，培養(yǎng)基（2）和（5）上的葉片，在接種后第5天葉片邊緣開始出現(xiàn)鮮綠色的顆粒，直徑約0.5～1.0mm左右，呈致密狀態(tài)，10d后，愈傷生長達到高峰，在多處葉片邊緣出現(xiàn)。培養(yǎng)基（5）上的愈傷在接種后15d開始分化

5、出綠色叢生芽點，但只停留在這一階段，不能進一步分化成苗。培養(yǎng)基（2）上的愈傷一直保持致密顆粒狀。培養(yǎng)基（1）（3）（4）（6）上的葉片沒有愈傷出現(xiàn)，只是葉片邊緣有少部分返綠，返綠部分取下接種于分化培養(yǎng)基上漸漸褐化死亡。不同培養(yǎng)基愈傷組織誘導率見表1。表1愈傷組織誘導率（略）　　2.2芽的分化　　　將培養(yǎng)基（2）和（5）上的愈傷分別轉(zhuǎn)入分化培養(yǎng)基（7）（8）（9），5d后，（8）和（9）上的愈傷均分化出苗，10d后達高峰時期。（8）上的苗生長較正常，（9）上的苗叢生密度過大，苗型細弱，生長緩慢，（7）上的愈傷

6、只能保持在叢生芽點狀態(tài)，30d后即漸漸褐化死亡。培養(yǎng)基（5）中產(chǎn)生的愈傷組織分化率明顯大于培養(yǎng)基（2）中產(chǎn)生的愈傷組織。3種分化培養(yǎng)基中幼苗分化率結果見表2。表2培養(yǎng)基（2）和（5）上的愈傷組織幼苗分化率（略）　　2.3根的分化　　　小苗約1～2cm高時轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基，3d后即可在小苗基部見到白色新根，不同培養(yǎng)基根分化率如表3。表3幼苗根分化率（略）可見，隨著NAA濃度增高，根分化率反而降低，以培養(yǎng)基（10）較合適。從葉片接種到小苗出瓶移栽，整個周期約1個月左右。此外，在實驗期間還用培養(yǎng)了約2個月的青蒿無菌

7、苗葉片接種培養(yǎng)基（2）和（5），葉片在培養(yǎng)基上皺縮，邊緣褐化，最后死亡，始終無愈傷出現(xiàn)。　　2.4試管苗移栽　　　試管苗揭去瓶蓋，在室內(nèi)煉苗3d，4h/d；3d后，置于室外弱光蔭蔽處煉苗2d，4h/d；2d后，移栽已高壓滅菌的珍珠巖，澆透定根水，每天葉面噴水保濕1～2次，約15d后，見苗基部長出乳白色新根，心葉開始生長，即表明成活，帶土移栽大田。移栽成活率93%以上?！　?小結本實驗的研究表明，以青蒿幼嫩葉片為外植體，MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，附加6BA1.0mg/L+2,4D0.3mg/L誘導愈傷組織，

8、附加6BA0.1mg/L+IAA0.3mg/L的培養(yǎng)基上分化，附加IAA0.1mg/L+NAA0.3mg/L的培養(yǎng)基生根，可以在較短周期內(nèi)從幼嫩葉片得到再生青蒿植株。該結果可應用于青蒿的生物技術育種，尤其是倍性育種上，具體思路如下：用秋水仙素溶液浸泡剛發(fā)芽的幼苗，幼苗在小花缽中生長，得到嵌和體植株，取生長初期的數(shù)片真葉（該葉片可能是多倍體組織），通過組織培養(yǎng)再生植株，得到純合的多倍體植株。無菌苗葉片接種誘導培養(yǎng)