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1、siRNA表達(dá)載體抑制宮頸癌SiHa細(xì)胞增殖的實(shí)驗(yàn)研究四川大學(xué)'醫(yī)S學(xué)ciE版d2007;38(4)JSichuanUniv(MedScEd:587—589i)…'.siRNA表達(dá)載體抑制宮頸癌SiHa細(xì)胞增殖的實(shí)驗(yàn)研究王丹青,彭芝蘭△,尹如鐵,牛曉宇,李大可,官立麗四川大學(xué)華西第二醫(yī)院婦產(chǎn)科(成都610041)【摘要】目的觀察HPV16E7siRNA表達(dá)載體對(duì)宮頸癌SiHa細(xì)胞增殖的影響.方法利用脂質(zhì)體將HPV16E7特異性siRNA表達(dá)載體轉(zhuǎn)染SiHa細(xì)胞,通過(guò)熒光定量RT—PCR檢測(cè)E7mRNA的變化;流式細(xì)胞儀檢測(cè)E7蛋白的
2、變化和細(xì)胞周期的分布;MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖的變化.結(jié)果HPV16E7siRNA表達(dá)載體可明顯抑制SiHa細(xì)胞E7mRNA和E7蛋白的表達(dá),抑制率分別為92.15%,84.3O;阻滯SiHa細(xì)胞由G期進(jìn)人S期;抑制細(xì)胞的生長(zhǎng).結(jié)論HPV16E7siRNA表達(dá)載體可以特異高效地抑制宮頸癌SiHa細(xì)胞E7基因的表達(dá),從而調(diào)控腫瘤細(xì)胞周期,抑制腫瘤細(xì)胞增殖.【關(guān)鍵詞】HPV16E7siRNA表達(dá)載體宮頸癌細(xì)胞增殖【中圖分類號(hào)】R737.33ExperimentalStudyonInhibitionofCervicalCarcinomaSiH
3、aCellProliferationbysiRNAExpressionVectorWANGDan—qing,PENGZhi—lan,YINRu—tie,N1UXiao—yu,L1Da—ke.GuanL—li.DepartmentofObstetricsandGynecology,PstChinaSecondHospital,SichuanUniversity,Chengdu610041,China[Abstract]ObjectiveT0observetheeffectofHPV16E7specificexpressionvecto
4、roncellproliferationincervicalcarcinomaSiHacells.MethodsTheHPV16E7siRNAexpressionvectorandemptyexpressionvectorweretransfectedintoSiHa~:ellsbyliposome.TheeffectsonE7mRNAandE7proteinexpression,cellcyclephaseandeellgrowthratewereexaminedrespectivelybyreal—timeRT—PCR.FCMa
5、ndMTTassay.ResultsTheHPV16E7siRNAexpressionvectorsignificantlyinhibitedtheexpressionlevelsofE7mRNAandE7protein,theinhibitionratesbeing92.15and84.30respectively.ItalsoinhibitedthetransitionfromGlphasetoSphaseandthegrowthofSiHacellline.ConclusionHPV16E7specificsiRNAexpre
6、ssionvectorcouldspecificallyandefficientlyinhibittheexpressionofE7geneandhenceitcouldregulatecellcycleandinhibitcellproliferationincervicalcarcinomaSiHacells.[Keywords]HPV16E7siRNAexpressionvectorCervicalcancerCellproliferation研究表明,人乳頭瘤病毒(HPV)16型E7基因在官頸癌的發(fā)生發(fā)展及惡性表型的維持中起
7、著至關(guān)重要的作用,因此它已成為宮頸癌基因治療的理想靶點(diǎn)之一.RNA干擾(RNAi)技術(shù)是新近發(fā)展起來(lái)的一種封閉基因表達(dá)的有效方法L1].已有研究證實(shí)化學(xué)合成的小干擾RNA(siRNA)能有效地抑制目的基因的表達(dá),但作用持續(xù)時(shí)間短[2],而siRNA表達(dá)載體的方法可能延長(zhǎng)作用持續(xù)時(shí)間.本研究擬通過(guò)載體介導(dǎo)的RNAi技術(shù)來(lái)封閉宮頸癌SiHa細(xì)胞E7基因的表達(dá),觀察HPV16E7siRNA表達(dá)載體對(duì)SiHa細(xì)胞增殖的影響.1材料和方法1.1細(xì)胞轉(zhuǎn)染SiHa細(xì)胞為HPV16陽(yáng)性的宮頸癌細(xì)胞株(購(gòu)自武漢大學(xué)典型物培養(yǎng)保藏中心).在前期研究中,
8、用脂質(zhì)體法將HPV16E7特異性siRNA表達(dá)載體(由本室設(shè)計(jì)構(gòu)建保存Ⅲ)和空載體轉(zhuǎn)染SiHa細(xì)胞,*國(guó)家自然科學(xué)基金(批準(zhǔn)號(hào)30371483)資助△Correspondingauthor,E—mail:pengzled@yahoo.
