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《紅藻氨酸誘導大鼠癲癇發(fā)作時海馬mglur5mrna表達變化的動態(tài)觀察論文》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內(nèi)容在學術論文-天天文庫。
1、紅藻氨酸誘導大鼠癲癇發(fā)作時海馬mGluR5mRNA表達變化的動態(tài)觀察論文.freelgkg-1）誘導大鼠癲癇發(fā)作時海馬代謝型谷氨酸受體5亞型（mGluR5）mRNA表達變化的病理特征.方法采用同位素S35dATP標記寡核苷酸探針原位雜交法檢測大鼠癲癇發(fā)作前后海馬mGluR5mRNA的表達變化，通過圖像分析系統(tǒng)進行定量處理.同時觀察大鼠行為學及腦電變化.結果KA注射后大鼠均出現(xiàn)嚴重邊緣性驚厥，腦電圖表現(xiàn)為陣發(fā)性癲癇樣放電.正常大鼠海馬中有豐富的mGluR5mRNA表達，以齒狀回和CA1區(qū)表達較高.KA注射后海馬各區(qū)mGluR5mRNA表達呈時間依賴性
2、下調(diào)，CA1，CA3，CA4區(qū)表達在2h呈現(xiàn)出顯著性差異（P0.05）.freelGluR5在癲癇發(fā)作后表達下降可能有助于限制神經(jīng)元網(wǎng)絡的異常興奮性，使細胞發(fā)揮自身保護性作用.Abstract:AIMToinvestigatetemporospatialchangesofmetabotropicglutamatereceptorsubtype5（mGluR5）mRNAexpressioninrathippocampusduringseizuresinducedbykainicacid（KA）.METHODSUsinginsituhybridizat
3、ionGluR5mRNAexpressionined.Therelativenum-berofhybridizationsignalsageanalysissystems.Theelectroencephalogram（EEG）andbehaviourchangesoftheratsultaneouslyobserved.RESULTSAllratsofKA-injectedgroupexhibitedseverelimbiccon-vulsions.TheEEGrecordingsalsoshoGluR5mRNApusidallayerofCA1
4、.AfterKAin-jection，mGluR5mRNAexpressionexhibitedtime-dependentdoGluR5mRNAarkedlydoodifiesmGluR5geneexpression，ayhelptolimitabnormalexcitabilityofneuronalGluRs）的發(fā)現(xiàn)是谷氨酸能突觸研究的一項重要進展.到目前為止，已經(jīng)克隆出8種mGluRs亞型（mGluR1-8），依據(jù)序列的同源性、信號轉(zhuǎn)導機制以及激動劑的選擇性，可以將其分為3組，Ⅰ組包括mGluR1和mGluR5，Ⅱ組包括mGluR2和mGl
5、uR3，Ⅲ組包括mGluR4，6，7，8.Ⅰ組受體與磷脂酶C（PLC）耦聯(lián)，激活后促使磷脂酰肌醇（PI）水解，產(chǎn)生三磷酸肌醇（IP3）和二?；视停―AG），IP3使內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中Ca2+釋放到胞質(zhì)中，導致胞質(zhì)中Ca2+濃度增高，DAG則可激活蛋白激酶C（PKC），增強NMDA受體介導的興奮毒性［1］.研究表明，Ⅰ組受體激動劑可以產(chǎn)生致癇作用，其拮抗劑可阻斷多種實驗性癲癇的發(fā)生，提示Ⅰ組受體在癲癇活動中發(fā)揮了重要作用［2，3］.以往多用藥理學方法研究mGluRs的作用，而有關癲癇發(fā)作期間特定腦區(qū)mGluRsmRNA表達水平的動態(tài)觀察研究較少.為此，我們采
6、用紅藻氨酸（KA）誘導大鼠癲癇發(fā)作模型，動態(tài)觀察致癇前后海馬Ⅰ組mGluR5亞型mRNA的表達變化，同時觀察大鼠行為學和腦電圖（EEG）表現(xiàn)，以期從分子水平進一步探討癲癇的發(fā)生機制.1材料和方法1.1材料雄性SD大鼠34只，體質(zhì)量200～250g，隨機分為對照組、KA注射后1，2，4，8，24和72h等7個實驗組，每組4只大鼠，共28只.KA（Sig-ma公司）腹腔注射10mgkg-1，對照組生理鹽水腹腔注射.6只大鼠用于描記EEG.所有大鼠均觀察行為學變化.1.2方法①EEG描記及組織切片制作:用原方法［4］;②探針標記:mGluR5寡核苷酸探針
7、序列［5］為5’-GGAGCGGAAGGAAGAAGATCCATCTACA-CAGCGTACCAAACCTTC-3’（由上海生物工程有限公司合成）.運用3’-末端標記法標記探針.將5μLS35dATP，2μL10×CobaltReactionBuffer，4μL（20ngμL-1）mGluR5寡核苷酸探針、1μL末端轉(zhuǎn)移酶、8μL滅菌水混合后，37℃水浴2.5h.選用Nensorb20TM核酸純化柱純化探針.探針標記效率為2.5GBqL-1.③原位雜交:雜交前取出腦片，風干.40gL-1多聚甲醛固定20min，0.1molL-1沖洗2次，每次5mi
8、n，4×SSC+1×Denhardt’s浸洗1h，依次進行700，900和1000mLL-1乙醇脫水各3min，氯仿脫脂1
