迷迭香酸對(duì)慢性腎功能不全大鼠系膜基質(zhì)及tgfβ1的影響論文

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1、迷迭香酸對(duì)慢性腎功能不全大鼠系膜基質(zhì)及TGFβ1的影響論文林威遠(yuǎn),黃榮桂,鄭興中【摘要】目的觀察迷迭香酸對(duì)慢性腎功能不全模型大鼠系膜基質(zhì)及轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGFβ1)的影響。方法制作大鼠慢性腎功能不全模型(5/6腎切除),以迷迭香酸作為干預(yù)因素,應(yīng)用免疫組織化學(xué)半定量法測定迷迭香酸對(duì)大鼠系膜基質(zhì)成分纖維連接蛋白(Fn)、膠原Ⅳ(ColⅣ)及TGFβ1的影響,電鏡觀察腎小球病理學(xué)變化,測定血、尿肌酐值。結(jié)果(1)與對(duì)照組比較,迷迭香酸組肌酐清除率(Ccr)水平升高(P0.05);(2)Fn、ColⅣ在腎臟細(xì)胞外基質(zhì)的沉積減少(P0.05);(3)TGFβ1表達(dá)減少(P0.05)。

2、結(jié)論迷迭香酸可以抑制TGFβ1的表達(dá),減少Fn及ColⅣ在腎小球細(xì)胞外基質(zhì)的沉積,延緩腎小球硬化,對(duì)慢性腎功能不全疾病可能具有治療價(jià)值?！娟P(guān)鍵詞】迷迭香酸;腎小球;細(xì)胞外基質(zhì);腎切除術(shù);轉(zhuǎn)化生長因子β;疾病模型,動(dòng)物細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)的增加是慢性進(jìn)行性腎小球病變的特征,腎小球ECM積聚是腎小球疾病發(fā)展至腎小球硬化的主要病理改變基礎(chǔ)。多種細(xì)胞因子通過對(duì)系膜細(xì)胞的作用參與調(diào)節(jié)腎小球ECM的分泌,.freelarinicacid)為水溶性的多酚類化合物。1958年由Ellis首次從唇形科植物迷迭香(RosmarinusoffinalisL.)中分離得到.freelL,查肌酐值,明顯高于正常值

3、(35～53μmol/L)者符合入選標(biāo)準(zhǔn)。1.2.2分組模型大鼠分為模型組和迷迭香酸組,未手術(shù)大鼠為對(duì)照組,每組6只。迷迭香酸組給予迷迭香酸100mg·kg-1·d-1灌胃,另2組給予等容積蒸餾水灌胃。8周后,留24h尿及心臟取血備查;切開腹腔,取出腎臟,4%甲醛緩沖液固定,石蠟包埋。另取部分腎組織，送電鏡室檢查。1.2.3免疫組織化學(xué)觀察采用SABC法,按試劑盒說明書操作。高倍鏡(×200)下隨機(jī)選擇20個(gè)腎小球和20個(gè)腎小管間質(zhì),根據(jù)染色面積和強(qiáng)度進(jìn)行半定量評(píng)分:無染色或微弱染色為0，染色面積25%為1，25%～50%為2，50%～75%為3，75%為4;基本不著色為0,著色淡者(淡黃)

4、為1,適中者(棕黃)為2,深者(棕褐)為3。兩者得分相加為最終值。1.2.4尿肌酐和血肌酐測定采用全自動(dòng)生化分析儀(德國Becman公司)檢測尿肌酐和血肌酐值,按公式換算成肌酐清除率:肌酐清除率=尿肌酐濃度(mg/mL)×1min尿量(mL)/血肌酐濃度(mg/mL)1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理數(shù)據(jù)用x±s表示,采用SPSS11.0處理方差檢驗(yàn)組間差異。組間兩兩比較采用LSD檢驗(yàn)。2結(jié)果2.1免疫組織化學(xué)觀測評(píng)分迷迭香酸可以抑制TGFβ1表達(dá),減少Fn及ColⅣ在腎ECM沉積(表1)。2.2免疫組織化學(xué)改變與對(duì)照組比較,模型組Fn及ColⅣ表達(dá)明顯增多,腎小球黃色及棕黃色、棕褐色面積大,著色深;迷迭

5、香酸組Fn及ColⅣ表達(dá)較對(duì)照組減少,黃色及棕黃色面積小,著色較淺。模型組TGFβ1表達(dá)較對(duì)照組明顯增多,腎小管及間質(zhì)黃色及棕黃色面積大,著色深;迷迭香酸組TGFβ1表達(dá)較對(duì)照組減少,黃色及棕黃色面積小,著色較淺(圖1)。表1腎小球系膜細(xì)胞外基質(zhì)及TGFβ1評(píng)分（略）Tab1TheeffectsofrosmarinicacidontheglomerularmesangiummatrixandTGFβ1n=6.Fn:纖維連接蛋白;ColⅣ:膠原Ⅳ;TGFβ1:轉(zhuǎn)化生長因子β1.與模型組比較,☆:P0.05,☆☆:P0.01.Fn:纖維連接蛋白;ColⅣ:膠原Ⅳ;TGFβ1:轉(zhuǎn)

6、化生長因子β1.A:對(duì)照組;B:模型組;C:迷迭香酸組.圖1Fn、ColⅣ、TGFβ1表達(dá)(SABC法×200)（略）Fig1TheexpressionofFn,ColⅣandTGFβ1inthekidneys(SABC×200)2.3病理學(xué)改變光鏡:模型組腎小球系膜細(xì)胞及系膜基質(zhì)增生明顯,有不同程度的萎縮、硬化,小球基底膜增厚,囊周纖維化,腎小管有擴(kuò)張和萎縮,間質(zhì)有大量炎癥細(xì)胞浸潤,伴纖維增生。迷迭香酸組系膜細(xì)胞及系膜基質(zhì)增生程度和硬化程度較輕,基底膜較薄,腎小管擴(kuò)張和萎縮改善,可見少量炎癥細(xì)胞浸潤(圖1)。電鏡:模型組系膜細(xì)胞增生及系膜基質(zhì)增生、擴(kuò)大明顯,并有少量沉積物,內(nèi)皮下大

7、量沉積物,上皮足突明顯融合,結(jié)構(gòu)紊亂;基底膜增厚,毛細(xì)血管壁增厚、萎陷;線粒體腫脹,溶酶體增多。迷迭香酸組系膜細(xì)胞及系膜基質(zhì)增生程度較輕,足突結(jié)構(gòu)基本正常,部分區(qū)域有輕度融合,基底膜增厚不明顯(圖2)。2.4血肌酐、內(nèi)生肌酐清除率的變化迷迭香酸對(duì)大鼠血肌酐、內(nèi)生肌酐清除率的影響見表2。3討論3.1腎小球系膜細(xì)胞的細(xì)胞外基質(zhì)在腎衰過程中的作用腎小球系膜細(xì)胞的ECM合成和降解的平衡對(duì)基質(zhì)增生與否起關(guān)鍵