微波輔佐提取-高效液相色譜法測定果蔬中的vc含量

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1、微波輔佐提取-高效液相色譜法測定果蔬中的含量應(yīng)用化學(xué)09952095陳智毅張?zhí)煜榕舜笮l(wèi)廖年華楊櫻芝黃秋香黃嘉歡潘潞怡黎淑貞謝宇虹摘要Vc在體內(nèi)參與多種反應(yīng)，如氧化還原過程，在生物氧化和還原作用以及細(xì)胞呼吸中起重要作用。本實(shí)驗(yàn)通過測定果蔬中的Vc含量，掌握高效液相色譜法原理及應(yīng)用，熟悉一般樣品前處理方法，掌握校準(zhǔn)曲線定量法。本實(shí)驗(yàn)采用Phenomenex18柱(250mm×4.6mm,I.D.5μm)；：3%的乙腈-0.05mol/LKH2PO4水溶液（v/v）作為流動相，流速1mL/min的HPLC操作條件；使用微波輔助提取技術(shù)提取水果中的Vc，采用紫外檢測器，在265nm波長

2、下測定Vc的吸光值。并與標(biāo)準(zhǔn)系列比較，以保留時間定性，以峰面積定量。Vc濃度在5~100mg/L范圍內(nèi)與色譜峰面積呈良好的線性關(guān)系（Y=38395x+11668,R2=0.999）。關(guān)鍵詞微波輔佐提取高效液相色譜法Vc紫外檢測器1.引言維生素（Vitamin，V）又叫L-抗壞血酸（AsorbiAid），是一種水溶性維生素。研究發(fā)現(xiàn)，維生素C在人體內(nèi)作為輔酶的成分調(diào)節(jié)機(jī)體代謝，減弱毛細(xì)血管脆性，增加機(jī)體抵抗力；維生素C的協(xié)同作用可以提高人體對鐵的吸收率，促進(jìn)外傷愈合。由于Vc是一種水溶性的強(qiáng)有力抗氧化劑并參與膠原蛋白的合成，它同時還具有防癌、預(yù)防動脈硬化、治療貧血、抗氧化和提高人

3、體免疫力等功效Vc的缺乏可導(dǎo)致多種疾病，其含量高低常作為某些疾病診斷及營養(yǎng)分析的重要指標(biāo)，因此Vc的定量分析在食品、醫(yī)藥等領(lǐng)域相當(dāng)重要【1】。下圖是Vc的結(jié)構(gòu)式：圖1.維生素c分子結(jié)構(gòu)式Vc在蔬果中普遍存在，尤其是柑桔類水果中含量較高。櫻桃、番石榴、辣椒、獼猴桃等水果中Vc含量在50-300mg/100g。微波輔助萃取具有快速高效、操作簡便、節(jié)省溶劑等優(yōu)點(diǎn)，在天然產(chǎn)物、環(huán)境、食品等領(lǐng)域中得到廣泛應(yīng)用。目前測定Vc的方法很多，包括藥典中的標(biāo)準(zhǔn)方法——碘量法、紫外分光光度法、熒光分光光度法、近紅外分光光度法、伏安法等【2】。各種方法均有自己的獨(dú)特之處，有些方法要求的實(shí)驗(yàn)條件和操作技

4、術(shù)較高，而有些方法步驟煩瑣，不利于快速分析。微波輔助萃取具有快速高效、操作簡便、節(jié)省溶劑等優(yōu)點(diǎn)，在天然產(chǎn)物、環(huán)境、食品等領(lǐng)域中得到廣泛應(yīng)用。本實(shí)驗(yàn)采用微波輔助萃取法快速萃取蔬果中的Vc，采用高效液相色譜進(jìn)行分析，以Vc標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的色譜峰面積對其濃度做校準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品中Vc的峰面積，由校準(zhǔn)曲線計算其濃度。1.實(shí)驗(yàn)部分1.儀器試劑儀器：高效液相色譜儀：L-2010（島津香港有限公司）；微波萃取儀（上海新儀微波化學(xué)科技有限公司）；色譜柱：依利特或Phenomenex18柱(250mm×4.6mm,I.D.5μm)。試劑：乙腈（色譜純），冰乙酸，維生素C，磷酸二氫鉀等均為分析純；西

5、紅柿、橘子、小西紅柿為果蔬樣品。實(shí)驗(yàn)用水為超純水。Vc標(biāo)準(zhǔn)溶液：快速準(zhǔn)確稱取0.025g，用1mol/L乙酸溶液溶解，定量轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中，用1mol/L乙酸溶液定容，得到100mg/L標(biāo)準(zhǔn)溶液備用，現(xiàn)用現(xiàn)配。色譜條件：流動相：3%的乙腈-0.05mol/LKH2PO4水溶液（v/v）；流速1mL/min；紫外檢測波長265nm；進(jìn)樣量10μL。2.實(shí)驗(yàn)步驟（1）按操作說明開啟液相色譜儀，設(shè)定方法參數(shù)。（2）樣品準(zhǔn)備：準(zhǔn)確稱取切碎的蔬果樣品小西紅柿5.0006g，西紅柿5.0220g，橘子5.0024g，以1mol/L乙酸50mL為萃取溶劑，微波功率設(shè)為600W，萃取時

6、間為10min，萃取溫度設(shè)定為恒溫50℃。萃取液過濾后用1mol/L乙酸溶液定容至100mL，制成供試品溶液。（3）定性分析：分別取10μL50mg/L的Vc標(biāo)準(zhǔn)溶液和供試品溶液，進(jìn)HPLC分析。根據(jù)保留時間定性分析蔬果中的Vc。（4）校準(zhǔn)曲線繪制：分別配制5，20，50，80，100mg/L的Vc樣品溶液，待液相色譜穩(wěn)定后進(jìn)樣分析。以Vc色譜峰面積對濃度作圖，繪制校準(zhǔn)曲線。（5）定量分析：供試品溶液經(jīng)0.45μm微孔濾膜過濾后進(jìn)行HPLC分析。記錄其Vc的色譜峰面積，根據(jù)校準(zhǔn)曲線計算蔬果樣品中Vc的含量，結(jié)果以mg/100g表示。（6）實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，按要求清理好儀器。3.實(shí)驗(yàn)結(jié)

7、果與討論1.標(biāo)準(zhǔn)曲線的測繪表1.標(biāo)準(zhǔn)曲線的濃度和峰面積標(biāo)準(zhǔn)溶液/mg·L-15205080100峰面積A193244758501195789831507573788688圖2.標(biāo)準(zhǔn)曲線由圖可得，所得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為：峰面積A=38395x+11668，相關(guān)系數(shù)R2=0.999。2.各種樣品提取液色譜圖的繪制分別以桔子、棗子、柚子、百香果四水果的提取液為樣品，色譜條件為：流動相：3%的乙腈-0.05mol/LKH2PO4水溶液（v/v）；流速1mL/min；紫外檢測波長265nm；進(jìn)樣量10μL