高效液相色譜分析實(shí)驗(yàn)

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1、儀器分析實(shí)驗(yàn)報(bào)告實(shí)驗(yàn)名稱：液相色譜分析實(shí)驗(yàn)學(xué)院：化學(xué)工程學(xué)院專業(yè)：化學(xué)工程與工藝班級(jí)：化工113班姓名：學(xué)號(hào)指導(dǎo)教師：張侃日期：2014年5月6日一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.了解HPLC的結(jié)構(gòu)，了解儀器的開(kāi)、關(guān)程序；2.了解流動(dòng)相的制備和樣品溶液的制備；3.掌握外標(biāo)法計(jì)算濃度的方法。二、實(shí)驗(yàn)原理液相色譜由泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測(cè)器、記錄儀等幾部分組成，試劑瓶中的流動(dòng)相被泵打入系統(tǒng)，樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動(dòng)相，被流動(dòng)相載入色譜柱內(nèi)，由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù)，在兩相中作相對(duì)運(yùn)動(dòng)，經(jīng)過(guò)反復(fù)多次的吸附—解吸的分配過(guò)程，各組分在移動(dòng)速度上產(chǎn)生較大的

2、差別，被分離成單個(gè)組分依次從柱內(nèi)流出，通過(guò)檢測(cè)器時(shí)，樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號(hào)傳送到記錄儀。高效液相色譜分析的流程。由泵將儲(chǔ)液瓶中的溶劑吸入色譜系統(tǒng)，然后輸出，經(jīng)流量與壓力測(cè)量之后，導(dǎo)入進(jìn)樣器。被測(cè)物由進(jìn)樣器注入，并隨流動(dòng)相通過(guò)色譜柱，在柱上進(jìn)行分離后進(jìn)入檢測(cè)器，檢測(cè)信號(hào)由數(shù)據(jù)處理設(shè)備采集與處理，并記錄色譜圖。廢液流入廢液瓶。遇到復(fù)雜的混合物分離（極性范圍比較寬）還可用梯度控制器作梯度洗脫。這和氣相色譜的程序升溫類似，不同的是氣相色譜改變溫度，而HPLC改變的是流動(dòng)相極性，使樣品各組分在最佳條件下得以分離。高效液相色譜的分離過(guò)程。同其他色譜過(guò)程一樣，HP

3、LC也是溶質(zhì)在固定相和流動(dòng)相之間進(jìn)行的一種連續(xù)多次交換過(guò)程。它借溶質(zhì)在兩相間分配系數(shù)、親和力、吸附力或分子大小不同而引起的排阻作用的差別使不同溶質(zhì)得以分離。三、儀器與試劑儀器：液相色譜儀（大連依利特）、10μL的微量注射器。試劑：乙腈和重蒸水溶液6:4混合液、2,2-雙[4-（4-氨基苯氧基）苯基]丙烷（BAPP）四、實(shí)驗(yàn)步驟1.流動(dòng)相的準(zhǔn)備準(zhǔn)備所需的流動(dòng)相乙腈和重蒸水，將其分別用有機(jī)濾膜和水膜過(guò)濾，再以6:4的比例混溶，然后超聲脫氣。2.開(kāi)機(jī)，色譜柱平衡當(dāng)步驟1完成后，開(kāi)機(jī)，待色譜柱平衡。3.樣品溶液的準(zhǔn)備取合適計(jì)量的樣品(如取50mg的BAPP溶

4、于50mL的水中)，在重蒸水里溶解，最后用容量瓶里定溶，最后用有機(jī)濾膜過(guò)濾，把它注入子彈頭里。1.基線的查看由于儀器內(nèi)部壓力的變化可以引起基線的不斷波動(dòng)，因此，需等待壓力穩(wěn)定后，基線平穩(wěn)才能進(jìn)行進(jìn)樣。2.樣品進(jìn)樣分析用25mL的微量注射器取5mL的BAPP溶液，微量注射器中不能有氣泡，將微量注射器的針頭插入注射器的孔時(shí)，打開(kāi)微量注射器閥，將BAPP注射進(jìn)去后，迅速關(guān)閉閥門，抽出針頭，等待儀器的分析結(jié)果。3.色譜柱的清洗分析工作結(jié)束后，要清洗進(jìn)樣閥中的殘留樣品，也要用適當(dāng)?shù)囊后w來(lái)清洗色譜柱。4.關(guān)機(jī)實(shí)驗(yàn)完畢后，關(guān)閉儀器和電腦。五、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)Y=701.3

5、93x+14.513峰高與濃度的關(guān)系圖Y=30830.8x-796.07峰面積與濃度的關(guān)系圖由上圖可得以下結(jié)論：該樣品的主峰出現(xiàn)在12.983min，在此之前與之后分別存在雜質(zhì)峰。主峰的峰寬為0.3326min，峰高為1619.79114mAU，峰面積為93.3238×104mAU*s。查濃度與峰面積以及濃度與峰高關(guān)系圖可以讀出：當(dāng)峰面積為9.33238×104mAU*s時(shí)，濃度C=3.05mg/mL；當(dāng)峰高為1619.79114mAU時(shí)，濃度C=2.29mg/mL。綜上所述，該未知液的濃度為2.29mg/mL。六、實(shí)驗(yàn)結(jié)論與分析由于實(shí)驗(yàn)組分比較簡(jiǎn)單

6、，只要在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，嚴(yán)格控制且定量進(jìn)樣，就能得出準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。若采用歸一化法或內(nèi)標(biāo)法，雖然能得到準(zhǔn)確更高的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，但由于實(shí)驗(yàn)操作及計(jì)算均較為復(fù)雜，實(shí)驗(yàn)及數(shù)據(jù)處理的時(shí)間長(zhǎng)，效率相對(duì)不高，故實(shí)驗(yàn)中采用外標(biāo)法作為定量的方法。?最佳色譜條件的選擇是本實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確度的關(guān)鍵。進(jìn)樣針進(jìn)樣時(shí)確保進(jìn)樣針中沒(méi)有殘留氣泡，另外，在進(jìn)不同濃度或不同的物質(zhì)前因先用甲醇溶液潤(rùn)洗干凈，以免相互影響。下面兩幅圖是標(biāo)準(zhǔn)溶液在不同濃度時(shí)峰面積圖和峰高圖。由給定的數(shù)據(jù)關(guān)系可做峰高與濃度，峰面積與濃度的關(guān)系圖，在根據(jù)所得的結(jié)果，在一下圖上找點(diǎn)，如下：由色譜圖和實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，我們組該實(shí)驗(yàn)做的

7、還是比較成功的。但實(shí)驗(yàn)中還是應(yīng)該注意以下幾點(diǎn)：1.注意注射器的選擇，應(yīng)選用平頭的注射器。2.實(shí)驗(yàn)過(guò)程中要注意儀器在運(yùn)行中不能進(jìn)入氣體，氣泡會(huì)使壓力不穩(wěn)，重現(xiàn)性差，所以在使用過(guò)程中要盡量避免產(chǎn)生氣泡。3.不能用純乙腈等作為流動(dòng)相，這樣會(huì)使單向閥粘住而導(dǎo)致泵不進(jìn)液。4.每次做完樣品后應(yīng)該用溶解樣品的溶劑清洗進(jìn)樣器。5.液相色譜柱應(yīng)選擇C-18反相色譜柱。6.使用緩沖溶液時(shí)，先用5%的乙腈和95%水沖洗，再用純的乙腈清洗40分鐘以充分洗去離子。7.流動(dòng)相的濃度不可以太高。