標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研制報(bào)告

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1、轉(zhuǎn)基因大豆GTS40-3-2基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研制報(bào)告完成單位：上海交通大學(xué)農(nóng)業(yè)部科技發(fā)展中心中國(guó)科學(xué)院植物生理生態(tài)研究所中國(guó)農(nóng)科院油料作物研究所中國(guó)計(jì)量科學(xué)院項(xiàng)目負(fù)責(zé)人：XXX完成時(shí)間：2010年12月摘要轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品成分檢測(cè)是轉(zhuǎn)基因安全管理和標(biāo)識(shí)的重要內(nèi)容，而轉(zhuǎn)基因生物標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)是獲得準(zhǔn)確、可靠、具有可比性檢測(cè)結(jié)果的保證。轉(zhuǎn)基因大豆GTS40-3-2轉(zhuǎn)化體在我國(guó)已批準(zhǔn)進(jìn)口用作加工原料。因此，制備轉(zhuǎn)基因大豆GTS40-3-2基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，將其用于轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測(cè)中的應(yīng)用十分必要。通過(guò)將轉(zhuǎn)基因大豆GTS40-3-2和其受體材料分別冷凍研磨，按質(zhì)量百分比稱

2、量配制形成5%，1%、0.5%、0%四個(gè)濃度水平的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。均勻性和穩(wěn)定性研究表明，本批標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的均勻性良好，可在常溫下運(yùn)輸1個(gè)月，長(zhǎng)期穩(wěn)定性達(dá)到12個(gè)月。本批標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)定值采用了8家實(shí)驗(yàn)室聯(lián)合定值，定值方法采用已通過(guò)國(guó)際循環(huán)驗(yàn)證的熒光定量PCR方法方法，最終本批轉(zhuǎn)基因大豆GTS40-3-2a、GTS40-3-2b、GTS40-3-2c、GTS40-3-2d標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的量值確定為4.87%、1.15%、0.56%和0%。本批標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)每瓶1g，使用時(shí)最小取樣量為100mg，可用于轉(zhuǎn)基因大豆GTS40-3-2的定性和定量PCR檢測(cè)，以及轉(zhuǎn)基因大豆GT

3、S40-3-2特異性檢測(cè)方法的評(píng)價(jià)。目錄1.概述2.候選物篩選3.標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)樣品制備4.均勻性檢驗(yàn)5.穩(wěn)定性檢驗(yàn)6.定值7.不確定度評(píng)定8.參考文獻(xiàn)9.附錄1.概述1.1研究背景隨著轉(zhuǎn)基因技術(shù)的發(fā)展，轉(zhuǎn)基因作物無(wú)論在種植面積，還是在轉(zhuǎn)化性狀的多樣性上均有突飛猛進(jìn)的發(fā)展。在轉(zhuǎn)基因作物商業(yè)化種植和應(yīng)用迅速發(fā)展的同時(shí)，給轉(zhuǎn)基因作物的安全管理帶來(lái)了挑戰(zhàn)。目前已有50多個(gè)國(guó)家頒布了相關(guān)法律對(duì)轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品進(jìn)行標(biāo)識(shí)，如歐盟實(shí)施強(qiáng)制性的轉(zhuǎn)基因標(biāo)簽制度，規(guī)定轉(zhuǎn)基因標(biāo)識(shí)的閾值為0.9%，巴西為1.0%，韓國(guó)為3.0%，日本、俄羅斯為5.0%。我國(guó)于2001年5月23

4、日頒布實(shí)施《農(nóng)業(yè)轉(zhuǎn)基因生物安全管理?xiàng)l例》，條例明確規(guī)定對(duì)大豆、玉米、棉花、油菜、番茄等5大類17種轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品應(yīng)當(dāng)有明顯的標(biāo)識(shí)。轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品成分檢測(cè)是轉(zhuǎn)基因生物安全管理和標(biāo)識(shí)重要內(nèi)容，要實(shí)施安全管理?xiàng)l例必須發(fā)展相關(guān)的轉(zhuǎn)基因檢測(cè)技術(shù)和方法。近年來(lái)，我國(guó)轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測(cè)技術(shù)方法和標(biāo)準(zhǔn)化工作進(jìn)展迅速，制訂了一系列轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測(cè)技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)。但是，在實(shí)際檢測(cè)工作中，由于轉(zhuǎn)基因植物標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的缺乏，已影響轉(zhuǎn)基因檢測(cè)技術(shù)的標(biāo)準(zhǔn)化和已有標(biāo)準(zhǔn)的執(zhí)行。標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)是具有高度均勻性、良好穩(wěn)定性和量值準(zhǔn)確性，用來(lái)校準(zhǔn)、對(duì)測(cè)量方法進(jìn)行評(píng)價(jià)或?yàn)槲镔|(zhì)定值的物質(zhì)，在分析測(cè)試各行業(yè)均得到廣

5、泛應(yīng)用。在轉(zhuǎn)基因生物檢測(cè)領(lǐng)域，標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)用于建立檢測(cè)方法、校準(zhǔn)和方法驗(yàn)證。有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)用于控制實(shí)驗(yàn)過(guò)程和方法，以保證分析測(cè)試數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性、可靠性、可重復(fù)性和可比性。建立轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研制與生產(chǎn)技術(shù)平臺(tái)是我國(guó)轉(zhuǎn)基因生物安全監(jiān)管的基本要求。1.2國(guó)內(nèi)外研究現(xiàn)狀為保證轉(zhuǎn)基因生物安全管理和標(biāo)識(shí)制度的順利實(shí)施，各國(guó)政府和研究人員十分重視轉(zhuǎn)基因標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研制工作。歐盟、美國(guó)和日本在2002年便開始轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的研究和制備工作。歐盟為了實(shí)施轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品標(biāo)識(shí)法規(guī)，位于比利時(shí)的歐盟聯(lián)合研究中心下屬的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)與測(cè)量研究所(Institutefor

6、ReferenceMaterialsandMeasurements，IRMM)成立專門的工作小組，建立轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的研制方法和工藝流程。到2009年，該工作小組已經(jīng)研制了一系列針對(duì)在歐盟商業(yè)化生產(chǎn)的轉(zhuǎn)基因作物標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，如轉(zhuǎn)基因大豆GTS40-3-2、356043、305423等品系，轉(zhuǎn)基因玉米（MON810、MON863、TC1507、Bt11和Bt176等品系）等。同時(shí)，也建立了一套完善和有效的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)制備方法和流程體系。歐盟標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)與測(cè)量研究所主要生產(chǎn)基體類標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。美國(guó)的轉(zhuǎn)基因生物標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)由美國(guó)石油化學(xué)家學(xué)會(huì)負(fù)責(zé)研制，主要生產(chǎn)植物

7、基因組DNA和種子這兩種形態(tài)的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，其生產(chǎn)的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)數(shù)量與歐盟相當(dāng)，涉及的轉(zhuǎn)化體也幾乎覆蓋目前已在國(guó)際市場(chǎng)上商業(yè)化種植的轉(zhuǎn)基因作物。另外日本以及一些生物公司，如SIGMA也制備了質(zhì)粒形態(tài)的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，但研制的數(shù)量比較有限?？偟膩?lái)說(shuō)，目前國(guó)內(nèi)外生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因成分檢測(cè)有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的機(jī)構(gòu)主要為歐盟的IRMM以及美國(guó)的AOCS。近年來(lái)我國(guó)在標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研究方面也開展了一定工作，制備了少量的用于轉(zhuǎn)基因生物檢測(cè)工作的工作標(biāo)樣，但仍然缺乏標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)制備關(guān)鍵核心技術(shù)和完善的驗(yàn)證、量值溯源體系，遠(yuǎn)不能滿足我國(guó)轉(zhuǎn)基因生物安全監(jiān)管和執(zhí)法的需求，這對(duì)轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的安全評(píng)價(jià)、身

8、份驗(yàn)證、國(guó)內(nèi)監(jiān)管、進(jìn)出口檢驗(yàn)、企業(yè)自控和國(guó)際貿(mào)易互認(rèn)帶來(lái)了一定的影響。1.3研究目的轉(zhuǎn)基因大豆GTS40-3-2轉(zhuǎn)化體是除草劑的轉(zhuǎn)基因大豆，由美國(guó)孟山都公司研制。目