香菇多糖的分離提取

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1、太原科技大學(xué)化學(xué)與生物工程學(xué)院《生物分離原理及技術(shù)》實(shí)驗(yàn)報(bào)告班級(jí)：生物工程1142班姓名：劉思學(xué)號(hào)：201121030205指導(dǎo)教師：楊艷日期：2014年4月3日香菇多糖的分離提取摘要：香菇多糖是香菇中分離出的一種重要的具有生理活性的物質(zhì)，具有抗病毒、抗腫瘤、增強(qiáng)人體免疫力等多種功能，在保健食品和藥品開(kāi)發(fā)方面具有廣闊的應(yīng)用前景。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)有機(jī)溶劑提取，經(jīng)過(guò)真空抽濾、真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮、離心分離多糖，并計(jì)算其產(chǎn)率。關(guān)鍵詞：香菇多糖提取分離糖類(lèi)的研究已有百余年的歷史，近20多年來(lái)，隨著膜的化學(xué)功能，免

2、疫物質(zhì)的化學(xué)研究的進(jìn)展以及探尋新藥物資源的不斷拓展和研究的深入，發(fā)現(xiàn)糖類(lèi)在生物體中的作用不僅是作為能量資源或結(jié)構(gòu)材料，更重要的是還參與了生命現(xiàn)象中細(xì)胞的各種活動(dòng)，具有多種多樣的生物學(xué)功能。多糖一般由十個(gè)分子以上的單糖通過(guò)糖苷鍵連接而成的高分子多聚物。多糖按來(lái)源大致可分為植物多糖、動(dòng)物多糖、海藻多糖、微生物多糖即細(xì)菌多糖和真菌多糖等。其中，具有很強(qiáng)生物活性的真菌多糖的研究日益受到重視，真菌多糖從真菌子實(shí)體、菌絲體、發(fā)酵液中分離，是一類(lèi)可以控制細(xì)胞分裂分化、調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)和衰老的活性多糖。真菌多糖作為

3、藥物研究始于20世紀(jì)50年代，在60年代以后成為免疫促進(jìn)劑受到廣泛關(guān)注，其中香菇多糖是研究得較透徹的多糖之一。香菇為擔(dān)子菌綱傘形科真菌，是世界名貴食用菌兼藥用菌之IV一，而香菇多糖則具有抗腫瘤、抗病毒、提高免疫和刺激干擾素形成等功能，因此已被大量應(yīng)用于保健食品、制藥等行業(yè)中。香菇多糖為白色或棕黃色粉末，對(duì)光和熱穩(wěn)定，具吸濕性，相對(duì)分子質(zhì)量較大，無(wú)甜味和還原性，部分能溶于水，在水中的溶解度隨分子質(zhì)最增大而降低，水溶液為中性，不溶于甲醇、已醇、丙酮等有機(jī)溶劑。本實(shí)驗(yàn)采用香菇子實(shí)體經(jīng)粉碎、浸取、除蛋白

4、、預(yù)處理、抽濾、真空濃縮、離心、真空干燥的流程，提取香菇多糖，并計(jì)算其產(chǎn)率。1試驗(yàn)部分1.1試劑與儀器1.1.1試劑原料：干香菇2g試劑：氯仿、正丁醇、醫(yī)用紗布、濃硫酸、苯酚，工業(yè)酒精、蒸餾水，葡萄糖，稀鹽酸，PH試紙，復(fù)合酶（木瓜蛋白酶：纖維素酶=2：1），1.1.2儀器100ml容量瓶，6個(gè)50ml容量瓶，玻璃棒，燒杯若干，錐形瓶若干，棕色瓶一個(gè)，抽濾瓶，電子天平，真空干燥箱，恒溫水浴鍋，紫外分光光度計(jì)，粉碎機(jī)，循環(huán)水式真空泵，臺(tái)式離心機(jī)。旋轉(zhuǎn)濃縮儀。1.2香菇多糖的提取純化1.2IVg干香

5、菇切成小塊，以1：10（重量比）加入水，用組織搗碎機(jī)進(jìn)行均質(zhì)；2.取20mL均質(zhì)液放入1L燒杯中，再加入30mL蒸餾水，加熱至沸后，溫火煮沸1小時(shí)，（注意：煮沸過(guò)程中用玻璃棒不斷攪拌，以免燒杯底部發(fā)生糊結(jié)；并間歇加入少量水，使杯內(nèi)液體體積保持在50mL左右；3.加熱完畢后，將杯內(nèi)液體用8層紗布過(guò)濾，除去殘?jiān)?，上清液轉(zhuǎn)入另一燒杯中；4.將上清液倒入圓底燒瓶中，在旋轉(zhuǎn)濃縮儀上進(jìn)行濃縮，濃縮條件為-0.1MPa、60℃，濃縮液體積至100mL左右停止；5.將濃縮液在1×10000g離心10min，將上

6、清液轉(zhuǎn)入另一燒杯，除去殘?jiān)?.上清液中加入等體積的氯仿正丁醇濃液（體積比為4：1），攪拌5min，靜置30分鐘；7.將混合液體在1×5000g下離心20min,分離水相；8.在水相中加入終濃度為80%的酒精，攪拌均勻，靜置20min，1×5000g下離心10min；9.取出沉淀物，放入已稱(chēng)重的干燥表面皿中，在真空干燥箱中80℃下真空干燥；10.干燥后，稱(chēng)重，計(jì)算多糖的產(chǎn)率；11.準(zhǔn)確稱(chēng)取干燥后多糖2mg于50ml容量瓶中，加水定容；12.取定容液0.2ml加入6%苯酚0.1ml，混勻，再加入濃

7、硫酸0.5ml，混勻，放置20min后，于490nm測(cè)吸光度；IV13.葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的制定：準(zhǔn)確稱(chēng)取葡萄糖2mg定容于50ml容量瓶中，分別取0.04、0.06、0.08、0.1、0.12、0.14、0.16及0.18ml，補(bǔ)水至0.2ml，依12步驟反應(yīng)液，并分別測(cè)吸光度，根據(jù)葡萄糖濃度和吸光度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；14.根據(jù)香菇多糖吸光度和葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算多糖純度。2結(jié)果與討論2.1實(shí)驗(yàn)結(jié)果2.1.1多糖含量測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線以吸光度A為橫坐標(biāo)，葡糖糖質(zhì)量m(mg)為縱坐標(biāo)繪制苯酚-硫酸法的標(biāo)準(zhǔn)曲線

8、。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線圖經(jīng)線性回歸，得多糖含量測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線。2.1.2多糖產(chǎn)率及純度的確定由真空干燥箱干燥后稱(chēng)重計(jì)算多糖產(chǎn)率；根據(jù)香菇多糖吸光度和葡糖糖標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算多糖純度。2.2問(wèn)題討論2.2.1多糖產(chǎn)率及純度的計(jì)算公式還原糖濃度=(A樣品-O.0114)／4.3125還原糖百分含量={(還原糖濃度×N×V)／m]×100％其中，A樣品-樣品在540nm處的吸光度多糖產(chǎn)率=0．9×(總糖百分含量-還原糖的百分含量)其中，0．9為還原糖換算為多糖的系數(shù)多糖純度={(多糖含量×N×V)／M}×100％I