手工濃縮血小板的匯集濾白及深低溫保存

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1、手工濃縮血小板的匯集濾白及深低溫保存郝俊海（通遼市中心血站）血小板輸注是治療各種因血小板減少或功能障礙引起出血的有效治療手段。目前國內(nèi)血小板制備多采用機(jī)采制備，由于機(jī)采無償獻(xiàn)血者的招募有一定難度并且隨著臨床血小板用量的逐年增加，很多地方的血小板供應(yīng)單獨(dú)靠機(jī)采已不能滿足臨床需求，而現(xiàn)有的血液資源大量被浪費(fèi)，如何利用現(xiàn)有的血液資源分離手工濃縮血小板供應(yīng)臨床，同時(shí)盡量減少手工血小板多人份輸注，容易引起同種免疫導(dǎo)致輸注無效的弊端是解決目前血小板臨床供應(yīng)的一個(gè)有效途徑。由于血小板免疫性輸注無效主要為HLA抗體引起，其次為HPA抗體[1，2]，去除手工濃縮血小板中的白細(xì)胞就可減

2、少輸血反應(yīng)和最大限度地避免同種免疫的發(fā)生。本站采用血小板專用濾白濾器以每10u為一治療量，制備新鮮匯集濾白血小板用于預(yù)防性血小板輸注患者，同時(shí)制備冰凍匯集濾白血小板，用于急診和手術(shù)止血患者，取得了較好的臨床效果?，F(xiàn)將方法報(bào)告如下。1材料與方法1.1材料200ml或400ml于6小時(shí)內(nèi)采集22℃±2℃保存的三聯(lián)袋全血；血小板專用匯集濾除白細(xì)胞輸血器（南京雙威生物醫(yī)學(xué)科技有限公司提供）；二甲基亞砜（DMSO）上海博光生物科技有限公司提供。1.2儀器設(shè)備Cyrofuge6000i大容量離心機(jī)（德國賀利氏）；BC-2800全自動血液細(xì)胞分析儀（深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公

3、司）；SANYOMDF-U52V-86℃醫(yī)用冰柜（日本三洋）；KJX-1A冰凍血漿解凍箱（蘇州市醫(yī)用儀器廠）PC-100血小板保存箱（美國HELMER）。1.3濃縮血小板的制備，采用富漿法制備。1.3.1第一次離心，賀利氏6000i離心機(jī)，22℃±2℃，加速度為9，減速度為4，200ml袋離心力465g，離心7min，400ml袋離心力1012g，離心8min。1.3.2注意血袋裝杯時(shí)不能打褶，防止離心后紅細(xì)胞掛壁。最佳離心效果以離心后上層血漿中無肉眼可見紅細(xì)胞，血漿與紅細(xì)胞分層清楚并且無明顯白膜層出現(xiàn)為標(biāo)準(zhǔn)，如果分層不清要混勻后適當(dāng)加大離心機(jī)轉(zhuǎn)速重離。分漿開始時(shí)可

4、以不用控制流速，血漿分出一半后要逐漸減慢流速，以上層血漿分凈且無紅細(xì)胞混入為標(biāo)準(zhǔn)。1.3.2第二次離心賀利氏6000i離心機(jī)，22℃±2℃，加速度為9，減速度為4，離心力3000g，離心10min。1.3.3血小板解聚濃縮血小板1u留漿20-30ml，2u3留漿30-50ml，分離后放置在血小板保存箱中（22℃±2℃）靜置1h后，取出輕輕搖動血袋，頻率60次/min，振幅5cm使血小板完全解聚后振蕩保存（22℃±2℃）。1.4新鮮匯集濾白血小板制備1.4.1匯集前血小板保存24h內(nèi)挑選檢驗(yàn)結(jié)果合格，外觀無肉眼可見紅細(xì)胞并且呈云霧狀，無細(xì)小顆粒，解聚完全的同型血小板，

5、每10u為一個(gè)匯集量進(jìn)行匯集。1.4.2匯集濾白在百級凈化間或凈化臺中采用無菌操作技術(shù)，將每袋血小板連接到血小板匯集濾器上，導(dǎo)入?yún)R集袋中，然后把匯集袋掛在架上，打開滑輪，調(diào)解流速為點(diǎn)線狀濾除白細(xì)胞。過濾完成把匯集濾白血小板袋熱合。如果臨床需要新鮮血小板就可直接發(fā)放，如需保存按下面方法制備。1.5冰凍匯集濾白血小板1.5.1低溫保護(hù)劑準(zhǔn)備DMSO原液采用無菌技術(shù)加入靜脈用生理鹽水稀釋成75%濃度，于-50℃冰凍柜中保存?zhèn)溆谩?.5.2DMSO加入制備完成的匯集濾白血小板袋稱重，去皮，按7.1%的比例計(jì)算需加入的75%DMSO量，在百級凈化間或凈化臺中采用無菌操作技術(shù)，

6、用一次性注射器抽取-50℃75%DMSO快速加入血小板袋中，加入后輕輕搖動血袋，加入后血小板袋的手感溫度應(yīng)無明顯變化。1.5.3冰凍保存加入DMSO的匯集濾白血小板平放裝入紙盒中，紙盒上面要開口，血小板袋的厚度不能超過0.5cm。將裝盒后的血小板平放在-80℃的深低溫冰箱中冰凍保存，要單層放置，不能疊放，放入后4小時(shí)內(nèi)不能開啟冰箱，防止在降溫過程中溫度回升，冰凍失敗。1.5.4解凍使用前把冰凍匯集濾白血小板從深低溫冰箱中取出，套上塑料袋掛在37℃循環(huán)水解凍箱中20-40min解凍。1.5.5解凍后外觀檢查解凍后的血小板外觀應(yīng)為淡黃色均勻混懸的液體，有旋光性，無絮狀物

7、和細(xì)絲為合格，可發(fā)放臨床。2計(jì)數(shù)隨機(jī)抽檢30袋（10u/每袋）匯集血小板，濾白前、濾白后和解凍后樣品用全自動血液細(xì)胞分析儀進(jìn)行計(jì)數(shù)結(jié)果（表1）表130份樣本W(wǎng)BC、RBC、PDW、PLT計(jì)數(shù)結(jié)果平均值、SD（n=30）及回收率計(jì)算濾白前濾白后解凍后殘留白細(xì)胞WBC（109/袋）0.116±0.0460.002±0.006殘留紅細(xì)胞RBC（1012/袋）0.010±0.0030.009±0.0033血小板平均分布寬度PDW15.88±0.2315.73±0.2116.10±0.20血小板計(jì)數(shù)PLT（1011/袋）4.94±0.704.59±0.624.52±0.6