美他多辛論文：美他多辛對酒精性脂肪肝大鼠cyp2e1影響的研究

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1、美他多辛論文：美他多辛對酒精性脂肪肝大鼠CYP2E1影響的研究【中文摘要】美他多辛是在國內(nèi)上市不久,專一治療酒精性脂肪肝病藥物。臨床上使用美他多辛主要用于治療酒精性脂肪肝,對其預(yù)防作用考察的不多。通過調(diào)研文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)CYP2E1與酒精性脂肪肝密切相關(guān),但國內(nèi)未有美他多辛與CYP2E1之間聯(lián)系的研究。本課題欲通過構(gòu)建酒精性脂肪肝大鼠模型,研究美他多辛對酒精性脂肪肝大鼠的預(yù)防作用,并探索其作用機(jī)制,研究美他多辛與CYP2E1的關(guān)系,分析CYP2E1是否是美他多辛的治療靶點。方法：清潔級Wistar雄性大鼠30只,體重

2、(200±20)g,每日給予大鼠標(biāo)準(zhǔn)食物和飲用水各2次,保持光照和避光循環(huán)飼養(yǎng)各12h。將所有大鼠隨機(jī)分為3組,分別為模型組10只,預(yù)防組10只,對照組10只。采用乙醇灌胃法建立酒精性脂肪肝大鼠模型：給予大鼠40%乙醇(劑量為乙醇8g·kg-1·d-1)灌胃，每日2次,間隔8h,至4wk末。5wk開始,將乙醇濃度增至50%(劑量為乙醇10g·kg-1·d-1)，至8wk末。對照組：不灌服乙醇,每日2次給予等體積滅菌注射用水；模型組：1-8wk建立酒精性脂肪肝大鼠模型的同時,在每次灌服乙醇1h后給予等體積滅菌注

3、射用水；預(yù)防組：1-8wk建立酒精性脂肪肝大鼠模型的同時,每次灌服乙醇1h后給予美他多辛(300mg·kg-1·d-1)。給大鼠超聲檢查,采用全自動生化儀來檢測血清指標(biāo),ELISA測定脂蛋白脂酶,HE染色觀察肝組織病理學(xué)變化,油紅O染色觀察肝脂肪沉積,天狼星紅染色染色觀察肝膠原染色,蒽酮法測定肝糖原含量,肝組織免疫組化檢測TNF-α、IL-6、CYP2E1的蛋白表達(dá),蛋白印記法檢測肝組織中CYP2E1蛋白含量,所得數(shù)據(jù)使用SPSS17.0統(tǒng)計分析軟件。結(jié)果：大鼠酒精性脂肪肝模型建立成功,模型組有1只大鼠死亡,

4、為酒精誤吸入氣管所致,其他組無大鼠死亡。模型組和預(yù)防組大鼠體重均有低,與對照組相比有顯著性差異(P<0.05)。肉眼觀察對照組大鼠肝臟為鮮紅色,邊緣銳利,表面光滑,切面無顆粒感；模型組大鼠肝臟體積增大,呈暗黃色,切面油膩,肝包膜欠平整或呈鋸齒狀改變：預(yù)防組大鼠肝臟色澤比模型組淺,但較對照組略深。超聲影像學(xué)顯示對照組大鼠肝臟包膜光滑,回聲均質(zhì),血管紋理清,肝臟大小正常；模型組大鼠超聲檢查示肝臟前場回聲增強(qiáng),后場回聲衰減,亮度強(qiáng),血管紋理不清,脂肪浸潤。預(yù)防組大鼠超聲檢查示肝臟回聲稍強(qiáng),分布欠均勻,血管紋理較模型

5、組顯示清晰。HE、油紅O、天狼猩紅病理學(xué)染色顯示對照組大鼠肝小葉完整,肝細(xì)胞呈多邊形,圍繞中央靜脈呈放射狀,肝竇清晰可見,肝索排列整齊,肝小葉匯管區(qū)基本結(jié)構(gòu)清晰可見,肝細(xì)胞內(nèi)無脂肪沉積,膠原組織少見；模型組肝細(xì)胞腫脹、氣球樣變,肝小葉中心脂肪液滴沉積非常嚴(yán)重,還可見大量紅色條狀膠原纖維,與對照組相比(P<0.01)；預(yù)防組：可見有少量脂肪沉積,匯管區(qū)可見少量膠原組織。與對照組和預(yù)防組相比,大鼠酒精性脂肪肝模型組ALT、AST、TG明顯升高(P<0.01,P<0.05),TC表達(dá)低(P<0.01)。肝糖原含量預(yù)

6、防組與對照組相比明顯下降(P<0.01),預(yù)防組大鼠肝糖原含量也低于對照組(P<0.05),比模型組高,但無統(tǒng)計學(xué)意義。酒精性脂肪肝大鼠肝臟脂蛋白脂酶含量明顯升高(P<0.01)；模型組肝糖原含量下降,預(yù)防組大鼠肝糖原含量高于模型組(P<0.01)。酒精性誘導(dǎo)脂肪肝后,TNF-α、IL-6水平均顯著升高,與前人研究報道一致,而給予美他多辛可有效抑制TNF-α、IL-6的水平。CYP2E1免疫組化和westernblot結(jié)果顯示模型組表達(dá)與對照組相比增高(P<0.05)；預(yù)防組CYP2E1表達(dá)較模型組明顯減少,

7、美他多辛顯著抑制了CYP2E1的表達(dá)。結(jié)論：大鼠灌服酒精8wk,經(jīng)超聲學(xué)檢查,病理學(xué)證實乙醇灌胃造模成功,酒精性脂肪肝的發(fā)病與CYP2E1的增高密切相關(guān),CYP2E1與多種生理因子共同參與了酒精性脂肪肝病的發(fā)生和發(fā)展。預(yù)防組CYP2E1蛋白水平表達(dá)下降,說明美他多辛有效抑制了CYP2E1的表達(dá)。CYP2E1活性減弱,有助于酒精性肝病患者的肝功能朝良性循環(huán)發(fā)展。美他多辛對大鼠酒精性脂肪肝有較好的預(yù)防作用?！居⑽恼縈etadoxine(MTDX)isanewspecificdrugthatisprescrib

8、edinhealingalcoholicfattyliverdiseaseinChina.ThoughMTDXiswidelyusedinclinictotreatalcoholicfattyliver,yettherearefewstudiesputattentiontoitspreventiveeffect.Byanalyzingtheliteratures,wefoundthatCYP2E1w