微生物實(shí)驗(yàn)-平板菌落計(jì)數(shù)與菌種分離純化技術(shù)

《微生物實(shí)驗(yàn)-平板菌落計(jì)數(shù)與菌種分離純化技術(shù)》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫。

1、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容實(shí)驗(yàn)一、顯微鏡的使用與單染色法實(shí)驗(yàn)二、革蘭氏染色與莢膜染色實(shí)驗(yàn)三、放線菌形態(tài)觀察與芽孢染色實(shí)驗(yàn)四、霉菌形態(tài)觀察與各大類微生物菌落特征實(shí)驗(yàn)五、酵母菌形態(tài)觀察、顯微計(jì)數(shù)與顯微測(cè)量技術(shù)實(shí)驗(yàn)六、培養(yǎng)基的制備實(shí)驗(yàn)七、菌種分離純化技術(shù)與平板菌落計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)八、水質(zhì)微生物學(xué)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)九、消毒與滅菌技術(shù)實(shí)驗(yàn)七、菌種分離純化與平板菌落計(jì)數(shù)一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、學(xué)習(xí)并掌握平板菌落計(jì)數(shù)的技術(shù)方法。2、學(xué)習(xí)并掌握微生物分離純化技術(shù)方法。3、了解土壤微生物區(qū)系的組成。二、實(shí)驗(yàn)原理土壤是微生物生活的大本營(yíng)，其中含有大量不同類型的微生物，可按照一定的方法將各類微生物通過分離進(jìn)行純培養(yǎng)，

2、并能對(duì)特定類群進(jìn)行數(shù)量測(cè)定。基本原理是通過稀釋使菌體細(xì)胞充分分散，單細(xì)胞得以生長(zhǎng)發(fā)育形成菌落?？墒褂孟♂尫ɑ蚱桨鍎澗€法進(jìn)一步純化，還可通過平板菌落計(jì)數(shù)，推算單位重量土壤樣品含有微生物的數(shù)量。三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容（一）土壤樣品的采集采樣一般定點(diǎn)于距離土表1－20cm處，先除去表土1－2cm，以無菌鏟采土并用無菌塑料袋分裝。（二）微生物平板菌落計(jì)數(shù)及分離純化1、制備土樣稀釋液（1）稱取1g土壤，加至100ml無菌水中，充分振蕩15分鐘，使土壤顆粒完全打散，土壤中的微生物充分分散到土壤溶液中去。（2）無菌操作，系列稀釋至10-8。2、平板菌落計(jì)數(shù)（1）平板涂布法①

3、倒平板將培養(yǎng)基（PDA）加熱融化，待冷至45~50℃倒平板，每種培養(yǎng)基倒三皿；②涂布用無菌吸管分別由10-4，10-5，10-6三管土壤稀釋液中各取0.1ml加入培養(yǎng)皿，用玻璃涂棒涂勻并做好記號(hào)；③培養(yǎng)倒置于28℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3~5d；注意：要有無菌水的對(duì)照（CK）?、苡?jì)數(shù)培養(yǎng)48h后，取出培養(yǎng)平板，算出同一稀釋度三個(gè)平板上的菌落，并按下列公式進(jìn)行計(jì)算：每克土樣中細(xì)菌數(shù)＝同一稀釋度三次重復(fù)的平均菌落數(shù)×稀釋倍數(shù)（2）、傾注平板法①樣品制備（土樣稀釋）同上②取樣用三支1ml無菌吸管分別吸取10-6、10-7和10-8的稀釋菌懸液各1ml，對(duì)號(hào)放入編好號(hào)

4、的無菌平皿，每個(gè)稀釋度放3個(gè)平皿。③倒平板向上述平皿中倒入45℃左右的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基約15毫升/平皿，水平迅速旋動(dòng)平皿，使培養(yǎng)基與菌液混合均勻，而又不使培養(yǎng)基蕩出平皿或?yàn)R到平皿蓋上。待培養(yǎng)基凝固后，將平板倒置于37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。注意：要有無菌水的對(duì)照（CK）④計(jì)數(shù)培養(yǎng)48h后，取出培養(yǎng)平板，算出同一稀釋度三個(gè)平板上的菌落，并按下列公式進(jìn)行計(jì)算：每克土樣中細(xì)菌數(shù)＝同一稀釋度三次重復(fù)的平均菌落數(shù)×稀釋倍數(shù)（1）倒平板按稀釋涂布平板倒平板，并用記號(hào)標(biāo)明培養(yǎng)基名稱，土樣編號(hào)和實(shí)驗(yàn)日期；（2）劃線在近火焰處，左手拿皿底，右手拿接種環(huán)，挑取上述的土壤懸

5、液一環(huán)在平板上劃線。劃線的方法很多，但無論采用那種方法，其目的都是通過劃線將樣品在平板上進(jìn)行稀釋，使之形成單個(gè)菌落；（3）菌種轉(zhuǎn)接取單菌落，轉(zhuǎn)接至試管斜面，37度，培養(yǎng)24小時(shí)。保存?zhèn)溆谩?、平板劃線分離法（三）培養(yǎng)基的制作乳糖蛋白胨培養(yǎng)基（300ml）配方：蛋白胨：10.0g4.0g牛肉膏：3.0g1.2g乳糖：5.0g2.0gNaCL：5.0g2.0g溴甲酚紫乙醇溶液0.4ml水：1000ml400ml分裝：40支18×180㎜試管10ml/管?。合燃佣攀闲」茉俜盅b液面略高于杜氏小管四、實(shí)驗(yàn)報(bào)告1、計(jì)算土壤樣品中細(xì)菌、真菌的含量。2、常見的微生物分

6、離純化的方法及原理。