菌種的分離純化技術(shù)——平板劃線法.ppt

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1、平板劃線技術(shù)王偉青名詞的認(rèn)識：菌落：由單個細(xì)菌（或其他微生物）細(xì)胞或一堆同種細(xì)胞在適宜固體培養(yǎng)基表面或內(nèi)部生長繁殖到一定程度；形成肉眼可見有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)等特征的子細(xì)胞的群落。當(dāng)樣品被稀釋到一定程度，與培養(yǎng)基混合，在一定培養(yǎng)條件下，每個能夠生長繁殖的細(xì)菌細(xì)胞都可以在平板上形成一個可見的菌落。菌落總數(shù)就是指在一定條件下（如需氧情況、營養(yǎng)條件、pH、培養(yǎng)溫度和時間等）每克（每毫升）檢樣所生長出來的細(xì)菌菌落總數(shù)。菌苔：細(xì)菌在固體培養(yǎng)基接種線上由母細(xì)胞繁殖長成的一片密集的、具有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)特征的細(xì)菌群落，是許多菌落連成一片形成的細(xì)菌在斜面培

2、養(yǎng)基接種線上長成的一片密集的細(xì)菌群落，不同屬種細(xì)菌的菌苔形態(tài)是不同的實驗原理平板劃線分離法是指把混雜在一起的微生物或同一微生物群體中的不同細(xì)胞用接種環(huán)在平板培養(yǎng)基表面通過分區(qū)劃線稀釋而得到較多獨立分布的單個細(xì)胞，經(jīng)培養(yǎng)后生長繁殖成單菌落，通常把這種單菌落當(dāng)作待分離微生物的純種。有時這種單菌落并非都由單個細(xì)胞繁殖而來的，故必須反復(fù)分離多次才可得到純種。其原理是將微生物樣品在固體培養(yǎng)基表面多次作“由點到線”稀釋而達到分離目的的。劃線的形式有多種，可將一個平板分成四個不同面積的小區(qū)進行劃線,第一區(qū)(A區(qū))面積最小，作為待分離菌的菌源區(qū)，第

3、二和第三區(qū)(B、C區(qū))是逐級稀釋的過渡區(qū)，第四區(qū)(D區(qū))，則是關(guān)鍵區(qū)，使該區(qū)出現(xiàn)大量的單菌落以供挑選純種用。為了得到較多的典型單菌落,平板上四區(qū)面積的分配應(yīng)是D＞C＞B＞A。實驗?zāi)康牧私馄桨鍎澗€分離純種的原理，并熟練掌握該操作法。實驗器材菌懸液牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基無菌培養(yǎng)皿，水浴鍋，接種環(huán)等。實驗步驟1．融化培養(yǎng)基：牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基放入水浴中加熱至融化。2．倒平板：待培養(yǎng)基冷卻至50℃左右，按無菌操作法倒2只平板(每皿約15m1)，平置，待凝固。右手持盛培養(yǎng)基的試管或三角瓶置火焰旁邊，用左手將試管塞或瓶塞輕輕地?fù)艹觯嚬芑蚱靠诒?/p>

4、持對著火焰；然后用右手手掌邊緣或小指與無名指夾住管(瓶)塞(也可將試管塞或瓶塞放在左手邊緣或小指與無名指之間夾住。如果試管內(nèi)或三角瓶內(nèi)的培養(yǎng)基一次用完，管塞或瓶塞則不必夾在手中)。左手拿培養(yǎng)皿并將皿蓋在火焰附近打開一縫，迅速例入培養(yǎng)基約15m1，加蓋后輕輕搖動培養(yǎng)皿，使培養(yǎng)基均勻分布在培養(yǎng)皿底部，然后平置于桌面上，待凝后即為平板。倒平板的方法3.劃線方法⑴用接種環(huán)以無菌操作挑取懸液一環(huán)，先在平板培養(yǎng)基的一邊作第一次平行劃線3-4條，再轉(zhuǎn)動培養(yǎng)皿約70°角，并將接種環(huán)上剩余物燒掉，待冷卻后通過第一次劃線部分作第二次平行劃線，再用同法通

5、過第二次平行劃線部分作第三次平行劃線和通過第三次平行劃線部分作第四次平行劃線A)。劃線完畢后，蓋上皿蓋，倒置于溫室培養(yǎng)。(2)將挑取有樣品的接種環(huán)在平板培養(yǎng)基上作連續(xù)劃線(圖)。劃線完畢后，蓋上皿蓋，倒置溫室培養(yǎng)。(3)其他劃線方法1.斜線法2.曲線法3.方格法4.放射法5.四格法實驗結(jié)果及討論1．實驗結(jié)果檢查每個平板劃線分離的結(jié)果，并繪制菌苔、菌落分布草圖。2．討論針對實驗原理、步驟、現(xiàn)象進行討論。通過本次實驗?zāi)銓W(xué)到了什么技術(shù)?請列舉出來并把它的技術(shù)要點寫出來.討論培養(yǎng)皿為什么要倒置培養(yǎng)?斜線劃線為什么要在變換角度時灼燒接種環(huán)?曲

6、線劃線為什么接上次劃線的末端繼續(xù)劃?