實(shí)驗(yàn)七稀釋平板計(jì)數(shù)法及土壤中真菌的分離純化

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1、實(shí)驗(yàn)七稀釋平板計(jì)數(shù)法及土壤中真菌的分離純化一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆栈罹?jì)數(shù)的基本原理及方法掌握從樣品中分離目的微生物的原理及方法二、實(shí)驗(yàn)原理---稀釋平皿計(jì)數(shù)法將微生物細(xì)胞充分稀釋到單個(gè)分散，把這些單個(gè)分散的細(xì)胞均勻涂布在平皿培養(yǎng)基上，培養(yǎng)后長出的菌落肉眼可見，每個(gè)菌落都由原液中單個(gè)細(xì)胞發(fā)育而來，計(jì)算菌落數(shù)，通過公式可以求出單位原樣品中的活菌數(shù)。每ml(g)樣品中的活菌數(shù)=（每皿菌落數(shù)平均值/取樣體積）×稀釋倍數(shù)二、實(shí)驗(yàn)原理---土壤中真菌的分離純化馬丁孟加拉紅---鏈霉素培養(yǎng)基馬丁培養(yǎng)基孟加拉紅鏈霉素三、實(shí)驗(yàn)器材（一）培養(yǎng)基1、牛肉膏蛋白胨培

2、養(yǎng)基2、馬丁孟加拉紅---鏈霉素培養(yǎng)基（二）其他1、無菌培養(yǎng)皿2、無菌吸管3、無菌水（三）儀器1、超凈工作臺(tái)2、玻璃刮鏟3、酒精棉球四、實(shí)驗(yàn)步驟---稀釋平板計(jì)數(shù)法1、熔化培養(yǎng)基2、倒平皿3、梯度稀釋法稀釋原菌樣品四、實(shí)驗(yàn)步驟4、涂平皿：選取1/106,1/107,1/108三個(gè)稀釋度計(jì)數(shù)，每皿取菌液0.1ml，用玻璃刮鏟涂布均勻，每個(gè)稀釋度做一個(gè)重復(fù)。5、37℃倒置培養(yǎng)2天6、計(jì)數(shù)：每ml原菌樣品中微生物的活細(xì)胞數(shù)（菌落形成數(shù)，CFU＝（同一稀釋度平板上菌落平均數(shù)×稀釋倍數(shù)）/原菌樣品體積（ml）菌落計(jì)數(shù)規(guī)則：（一）選擇平均菌落數(shù)在3

3、0~300間的平板1、只有一個(gè)稀釋度符合，以該稀釋度的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告；2、有兩個(gè)稀釋度符合，取決于二者比值（高稀釋度的菌落數(shù)除以低稀釋度的菌落數(shù)的值）：1）若0.5≤比值≤2，以兩稀釋度的菌落數(shù)乘稀釋倍數(shù)所得的值的均值報(bào)告。2）若2≤比值或比值≤0.5，則取其中較少的菌落總數(shù)進(jìn)行報(bào)告。（二）所有菌落數(shù)均不在30~300間以最接近30或300的平均菌落數(shù)乘稀釋倍數(shù)1、若所有稀釋度的菌落平均數(shù)均大于300，則按稀釋倍數(shù)最高的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告；2、若所有稀釋度的菌落平均數(shù)均小于30，則按稀釋倍數(shù)最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍

4、數(shù)報(bào)告；四、實(shí)驗(yàn)步驟---從土壤里分離真菌1、熔化培養(yǎng)基2、倒平皿3、捻碎土樣，將土樣溶解在90ml無菌水三角瓶中4、梯度稀釋法稀釋土樣10g90ml10-110-210-310-410-54、涂平皿：每個(gè)稀釋度均需要涂布平皿，每皿取菌液0.1ml，用玻璃刮鏟涂布均勻。5、28℃倒置培養(yǎng)3~7天6、觀察并描述真菌菌落特征五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果及分析稀釋平皿計(jì)數(shù)法：稀釋倍數(shù)106107108菌落數(shù)每ml原菌樣品中微生物的活細(xì)胞數(shù)（菌落形成數(shù)，CFU＝（同一稀釋度平板上菌落平均數(shù)×稀釋倍數(shù)）/原菌樣品體積（ml）描述酵母菌菌落特征：描述霉菌菌落特征