稀釋平板計數法.doc

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1、檢測方法------稀釋平板計數法一、原理稀釋平板計數是根據微生物在固體培養(yǎng)基上所形成的單個菌落，即是由一個單細胞繁殖而成這一培養(yǎng)特征設計的計數方法，即一個菌落代表一個單細胞。計數時，首先將待測樣品制成均勻的系列稀釋液，盡量使樣品中的微生物細胞分散開，使成單個細胞存在（否則一個菌落就不只是代表一個細胞），再取一定稀釋度、一定量的稀釋液接種到平板中，使其均勻分布于平板中的培養(yǎng)基內。經培養(yǎng)后，由單個細胞生長繁殖形成菌落，統(tǒng)計菌落數目，即可計算出樣品中的含菌數。此法所計算的菌數是培養(yǎng)基上長出來的菌落數，

2、故又稱活菌計數。二、器材1．活材料：菌劑。2．培養(yǎng)基：酵母浸粉0.5%、蛋白胨1%、氯化鈉1%、瓊脂18%、PH7.0-7.2。3．器材：90ml無菌水、99ml無菌水、9ml無菌水、無菌平皿、lml無菌吸管（或移液槍）、天平、稱樣瓶、記號筆等。三、實驗方法1．樣品稀釋液的制備準確吸取待測樣品l0ml（粉劑稱取1g），放入裝有90ml（粉劑99ml）無菌水將水滅好，檢測前稱量，在水中加1滴吐溫80。并放有小玻璃珠的250ml三角瓶中，置搖床上振蕩60min，使微生物細胞分散，靜置20-30s，即成

3、10-1稀釋液；再用1ml無菌吸管（或移液槍），吸取10-1稀釋液lml，移入裝有9ml無菌水的試管中，震蕩60秒，讓菌液混合均勻，即成10-2稀釋液；再換一支無菌吸管(或槍頭)吸取10-2稀釋液1ml，移入裝有9ml無菌水的試管中，也震蕩器上震蕩60秒，即成l0-3稀釋液；以此類推，連續(xù)稀釋，制成10-4、10-5、10-6、10-7、10-8、10-9等一系列稀釋菌液。通常測定細菌菌劑含菌數時，采用10-8稀釋度，測粉劑取10-9?？烧{整樣品加入量，使平板上菌落數在50-150之間。2．平板接

4、種培養(yǎng)利用混合平板培養(yǎng)法用無菌吸管按無菌操作要求分別吸取稀釋液1ml放入4個無菌平板中，然后分別倒入已融化并冷卻至45—50℃的細菌培養(yǎng)基，輕輕晃動動平板30秒，使菌液與培養(yǎng)基混合均勻，冷疑后倒置，以無菌水做空白對照，按相同方法操作，37℃培養(yǎng)。24小時后即可計數。改變了培養(yǎng)基與培養(yǎng)溫度，比原有方法效率高。四、計算菌落數：將結果填入下表中稀釋倍數菌落數1234空白1g樣品活菌數（菌落平均數-空白）*稀釋倍數