實(shí)驗(yàn)十一 稀釋平板測數(shù)法.doc

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1、實(shí)驗(yàn)十一稀釋平板測數(shù)法一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康牧私庀♂屍桨逵?jì)數(shù)的原理，掌握涂抹平板培養(yǎng)法和混合平板培養(yǎng)法，認(rèn)識細(xì)菌、放線菌、霉菌的菌落特征。二、實(shí)驗(yàn)原理???稀釋平板計(jì)數(shù)是根據(jù)微生物在固體培養(yǎng)基上所形成的單個菌落，即是由一個單細(xì)胞繁殖而成這一培養(yǎng)特征設(shè)計(jì)的計(jì)數(shù)方法，即一個菌落代表一個單細(xì)胞。計(jì)數(shù)時，首先將待測樣品制成均勻的系列稀釋液，盡量使樣品中的微生物細(xì)胞分散開，使成單個細(xì)胞存在（否則一個菌落就不只是代表一個細(xì)胞），再取一定稀釋度、一定量的稀釋液接種到平板中，使其均勻分布于平板中的培養(yǎng)基內(nèi)。經(jīng)培養(yǎng)后，由單個細(xì)胞生長繁殖形成菌落，統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目，即可計(jì)算出樣品中的含菌數(shù)。此法

2、所計(jì)算的菌數(shù)是培養(yǎng)基上長出來的菌落數(shù)，故又稱活菌計(jì)數(shù)。一般用于某些成品檢定（如殺蟲菌劑等）、生物制品檢驗(yàn)、土壤含菌量測定及食品、水源的污染程度的檢驗(yàn)。三、實(shí)驗(yàn)器材??????1．活材料：蘇云金芽孢桿菌（Bacillusthuringiensis）菌劑。2．培養(yǎng)基：牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基（附錄三、1）3．器材：90ml無菌水、9ml無菌水、無菌平皿、lml無菌吸管、天平、稱樣瓶、記號筆、玻璃刮鏟等。四、實(shí)驗(yàn)方法???1．樣品稀釋液的制備?準(zhǔn)確稱取待測樣品l0g，放入裝有90ml無菌水并放有小玻璃珠的250ml三角瓶中，用手或置搖床上振蕩20min，使微生物細(xì)胞分散

3、，靜置20-30s，即成10-1稀釋液；再用1ml無菌吸管，吸取10-1稀釋液lml，移入裝有9ml無菌水的試管中，吹吸3次，讓菌液混合均勻，即成10-2稀釋液；再換一支無菌吸管吸取10-2稀釋液1ml，移入裝有9ml無菌水的試管中，也吹吸三次，即成l0-3稀釋液；以此類推，連續(xù)稀釋，制成10-4、10-5、10-6、10-7、10-8、10-9等一系列稀釋菌液（圖22-1）。圖22-1?平板計(jì)數(shù)法中樣品的稀釋和稀釋液的取樣培養(yǎng)用稀釋平板計(jì)數(shù)時，待測菌稀釋度的選擇應(yīng)根據(jù)樣品確定。樣品中所含待測菌的數(shù)量多時，稀釋度應(yīng)高，反之則低。通常測定細(xì)菌菌劑含菌數(shù)時，采用10

4、-7、10-8、10-9稀釋度，測定土壤細(xì)菌數(shù)量時，采用10-4、10-5、10-6稀釋度，測定放線菌數(shù)量時，采用l0-3、10-4、10-5稀釋度，測定真菌數(shù)量時，采用10-2、10-3、10-4稀釋度。2．平板接種培養(yǎng)?平板接種培養(yǎng)有混合平板培養(yǎng)法和涂抹平板培養(yǎng)法兩種方法。???（1）混合平板培養(yǎng)法?將無菌平板編上10-7、10-8、10-9號碼，每一號碼設(shè)置三個重復(fù)，用無菌吸管按無菌操作要求吸取10-9稀釋液各1ml放入編號10-9的3個平板中，同法吸取10-8稀釋液各lml放入編號10-8的3個平板中，再吸取10-7稀釋液各lml放入編號10-7的3個平

5、板中（由低濃度向高濃度時，吸管可不必更換）。然后在9個平板中分別倒入已融化并冷卻至45—50℃的細(xì)菌培養(yǎng)基(圖22-2)，輕輕轉(zhuǎn)動平板，使菌液與培養(yǎng)基混合均勻，冷疑后倒置，適溫培養(yǎng)。至長出菌落后即可計(jì)數(shù)。（2）涂抹平板計(jì)數(shù)法?涂抹平板計(jì)數(shù)法與混合法基本相同，所不同的是先將培養(yǎng)基熔化后趁熱倒入無菌平板中，待凝固后編號，然后用無菌吸管吸取0.1ml菌液對號接種在不同稀釋度編號的瓊脂平板上（每個編號設(shè)三個重復(fù)）。再用無菌刮鏟將菌液在平板上涂抹均勻（圖22-3），每個稀釋度用一個滅菌刮鏟，更換稀釋度時需將刮鏟灼燒滅菌。在由低濃度向高濃度涂抹時，也可以不更換刮鏟。將涂抹好

6、的平板平放于桌上20—30min，使菌液滲透入培養(yǎng)基內(nèi)，然后將平板倒轉(zhuǎn)，保溫培養(yǎng)，至長出菌落后即可計(jì)數(shù)。五、實(shí)驗(yàn)作業(yè)：?將實(shí)驗(yàn)結(jié)果填入下表中稀釋度10-710-810-9菌落數(shù)123平均123?平均12?3?平均????????????1g樣品活菌數(shù)???計(jì)算結(jié)果時，常按下列標(biāo)準(zhǔn)從接種后的3個稀釋度中選擇一個合適的稀釋度，求出每克菌劑中的含菌數(shù)。???（1）同一稀釋度各個重復(fù)的菌數(shù)相差不太懸殊。???（2）細(xì)菌、放線菌、酵母菌以每皿30—300個菌落為宜，霉菌以每皿10—100個菌落為宜。選擇好計(jì)數(shù)的稀釋度后，即可統(tǒng)計(jì)在平板上長出的菌落數(shù)，統(tǒng)計(jì)結(jié)果按下式計(jì)算。混

7、合平板計(jì)數(shù)法：每克樣品的菌數(shù)=同一稀釋度幾次重復(fù)的菌落平均數(shù)×稀釋倍數(shù)涂抹平板計(jì)效法：???每克樣品的菌數(shù)=同一稀釋度幾次重復(fù)的菌落平均數(shù)×10×稀釋倍數(shù)