最新實驗七-稀釋平板計幻燈片.ppt

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1、實驗七-稀釋平板計二、實驗原理---稀釋平皿計數(shù)法將微生物細胞充分稀釋到單個分散，把這些單個分散的細胞均勻涂布在平皿培養(yǎng)基上，培養(yǎng)后長出的菌落肉眼可見，每個菌落都由原液中單個細胞發(fā)育而來，計算菌落數(shù)，通過公式可以求出單位原樣品中的活菌數(shù)。每ml(g)樣品中的活菌數(shù)=（每皿菌落數(shù)平均值/取樣體積）×稀釋倍數(shù)二、實驗原理---土壤中真菌的分離純化馬丁孟加拉紅---鏈霉素培養(yǎng)基馬丁培養(yǎng)基孟加拉紅鏈霉素菌落計數(shù)規(guī)則：（一）選擇平均菌落數(shù)在30~300間的平板1、只有一個稀釋度符合，以該稀釋度的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告

2、；2、有兩個稀釋度符合，取決于二者比值（高稀釋度的菌落數(shù)除以低稀釋度的菌落數(shù)的值）：1）若0.5≤比值≤2，以兩稀釋度的菌落數(shù)乘稀釋倍數(shù)所得的值的均值報告。2）若2≤比值或比值≤0.5，則取其中較少的菌落總數(shù)進行報告。（二）所有菌落數(shù)均不在30~300間以最接近30或300的平均菌落數(shù)乘稀釋倍數(shù)1、若所有稀釋度的菌落平均數(shù)均大于300，則按稀釋倍數(shù)最高的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告；2、若所有稀釋度的菌落平均數(shù)均小于30，則按稀釋倍數(shù)最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告；四、實驗步驟---從土壤里分離真菌1、熔化培養(yǎng)

3、基2、倒平皿3、捻碎土樣，將土樣溶解在90ml無菌水三角瓶中4、梯度稀釋法稀釋土樣10g90ml10-110-210-310-410-54、涂平皿：每個稀釋度均需要涂布平皿，每皿取菌液0.1ml，用玻璃刮鏟涂布均勻。5、28℃倒置培養(yǎng)3~7天6、觀察并描述真菌菌落特征五、實驗結(jié)果及分析稀釋平皿計數(shù)法：每ml原菌樣品中微生物的活細胞數(shù)（菌落形成數(shù)，CFU＝（同一稀釋度平板上菌落平均數(shù)×稀釋倍數(shù)）/原菌樣品體積（ml）描述酵母菌菌落特征：描述霉菌菌落特征本章主要內(nèi)容提綱1中藥質(zhì)控現(xiàn)狀2中藥質(zhì)控方向3中藥質(zhì)控模式1中

4、藥質(zhì)控現(xiàn)狀中藥質(zhì)量控制根本目標：保證中藥安全有效。而中藥質(zhì)控的現(xiàn)行目標：保證中藥材或制劑的一致性和穩(wěn)定性。目前中藥內(nèi)在質(zhì)量控制模式基本上是“惟成分論”，即通過對個別指標性成分進行定性或/和定量分析來實現(xiàn)質(zhì)量控制和評價。中藥與化學(xué)藥品質(zhì)量標準的根本區(qū)別:化學(xué)藥品：分子結(jié)構(gòu)清楚，構(gòu)效關(guān)系明確，鑒別、檢查、含量測定可以直接作為療效評價的指標。中藥：在中醫(yī)理論指導(dǎo)下，尤其是復(fù)方制劑，檢測任何一種活性成分均不能體現(xiàn)其整體療效?，F(xiàn)行中藥質(zhì)量控制的基本模式是參照國外植物藥的質(zhì)量控制方法，借鑒化學(xué)藥品質(zhì)量控制的模式建立的。1中

5、藥質(zhì)控現(xiàn)狀1中藥質(zhì)控現(xiàn)狀中藥化學(xué)指紋圖譜技術(shù)對中藥質(zhì)量控制有一定的促進作用，但中藥化學(xué)成分變化因素較為復(fù)雜，選擇合理的指紋信息難度較大，其重現(xiàn)性、耐受性及譜效關(guān)系等還有待深入研究。中藥化學(xué)指紋圖譜實質(zhì)上是中藥部分成分的“化學(xué)條碼”，與安全性、有效性關(guān)聯(lián)意義不大。1中藥質(zhì)控現(xiàn)狀如冬蟲夏草測定腺苷含量、板藍根檢測精氨酸,既不是其主要有效成分,也不是其專屬性成分,對其中藥質(zhì)量控制幾乎沒有實際意義。即使是檢測有效成分,往往量效關(guān)系不明顯：如人參的人參總皂苷：人參(主根)約含2%,人參須約含5%,人參葉可達10%。1中藥

6、質(zhì)控現(xiàn)狀大部分中藥的有效成分仍未得以闡明。據(jù)統(tǒng)計，《中國藥典》2005年版(一部)共收載中藥材(含飲片和提取物)572種，其中只有60%有過化學(xué)成分研究報道，約20%進行過較系統(tǒng)的化學(xué)成分研究，至今已闡明其有效成分的品種不到5%。1中藥質(zhì)控現(xiàn)狀中藥個別或部分指標性成分一致性和穩(wěn)定性≠制劑質(zhì)量一致性和穩(wěn)定性≠臨床上安全性和有效性！2　中藥質(zhì)控方向目前中藥質(zhì)量控制和評價的主要手段（《中國藥典》2005年版一部基本上是用這兩種方法）：形性檢測法＋化學(xué)檢測法質(zhì)控策略探索：多元化中藥質(zhì)量控制和評價模式形性檢測＋化學(xué)檢測＋

7、生物檢測（三位一體）2　中藥質(zhì)控方向中藥質(zhì)量控制和評價的方法可以簡單概括為：形性檢測法、化學(xué)檢測法、生物檢測法。形性檢測主要指以藥材的形狀、大小、顏色、氣味、表面特征、質(zhì)地、斷面等表觀性狀來判別藥材的種類和真?zhèn)危Σ糠炙幉妮o以簡單的理化試驗。2　中藥質(zhì)控方向化學(xué)檢測主要是利用藥材所含化學(xué)成分的某些物理性質(zhì)或化學(xué)反應(yīng)來對中藥進行定性和定量分析，一般可用于含不同化學(xué)成分的性狀相似而又無明顯顯微特征的藥材。生物檢測是利用生物體包括整體動物、離體組織、器官、細胞和微生物等評估藥物生物活性(包括藥效和毒性)的一種方法。

8、中藥質(zhì)控方向2.1形性檢測從主觀性和模糊性（趨向）組織形態(tài)特征三維化、可視化、定量化。突破傳統(tǒng)的二維平面局限，借助計算機圖形學(xué)、計算機三維重建、體視學(xué)和圖像分析系統(tǒng)等手段，將生藥組織形態(tài)學(xué)研究推向三維化、可視化、定量化?！皵?shù)字可視化中藥”技術(shù)（中藥計算機三維重建與顯示技術(shù)）（中藥計算機三維仿真技術(shù)）組織連續(xù)切片圖形量化得到深度信息（將物體不同切片上的二維圖像按照切片的空間位置關(guān)系依次疊