飼料原料中赭曲霉毒素的快速篩查膠體金快速定量法

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1、《飼料原料中赭曲霉毒素的快速篩查膠體金快速定量法》江西省地方標(biāo)準(zhǔn)編制說(shuō)明一、標(biāo)準(zhǔn)制定意義（一）介紹赭曲霉毒素A是由多種生長(zhǎng)在糧食（小麥、玉米、大麥、燕麥、黑麥、大米和黍類等）、花生、蔬菜（豆類）等農(nóng)作物上的曲霉和青霉產(chǎn)生的。動(dòng)物攝入霉變飼料后，這種毒素也可能出現(xiàn)在豬和母雞等的肉中。赭曲霉毒素主要損害動(dòng)物肝臟與腎臟，引起肝臟和腎臟損傷，大量毒素也可能引起動(dòng)物腸黏膜炎癥和壞死。有報(bào)道指出，食物中的OTA與一種致命的地方性腎臟疾?。╞alkanendemicnephropathy）有關(guān)，且有致癌、致畸作用，近年來(lái)引起了人類營(yíng)養(yǎng)學(xué)家的重視。正常條件下，小麥和

2、玉米受OTA污染的機(jī)率較小，約1%～5%，其含量為0.01～5mg/kg；大麥和燕麥被污染的機(jī)率較高，約為10%，其含量一般在0.1mg/kg以下，個(gè)別樣品高達(dá)27mg/kg。赭曲霉毒素包括3種類型，毒性強(qiáng)弱順序是：OTA>OTC>OTB。OTB是OTA的脫氯衍生物，OTC是OTA的乙基酯，OTB和OTC的含量一般較低，毒性較OTA小。因此，飼料檢測(cè)時(shí)可以主要分析OTA含量。目前，小麥、大麥、玉米等谷類作物中OTA的測(cè)定方法有薄層色譜法（TLC）、酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）、氣相色譜法（GC）、高效液相色譜法（HPLC）、高效液相色譜-質(zhì)譜法（HP

3、LC-MS）。TLC法繁瑣費(fèi)時(shí)，且靈敏度、特異性較差，提取過(guò)程中所需有機(jī)溶劑品種多且量大，易污染環(huán)境，對(duì)人體有較大危害。ELISA法測(cè)定結(jié)果受試劑盒差異、實(shí)驗(yàn)溫度、儀器靈敏度等條件影響較大。GC、GC-MS、HPLC和HPLC-MS8法普遍存在著樣品前處理過(guò)程復(fù)雜，靈敏度易受樣品的凈化、濃縮等步驟的影響，耗時(shí)，檢測(cè)設(shè)備昂貴，并要求有專業(yè)的技術(shù)人員及較長(zhǎng)的分析周期。同時(shí)，這些檢測(cè)方法無(wú)一例外要求在檢測(cè)過(guò)程中使用毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液，給環(huán)境和檢測(cè)人員的安全造成風(fēng)險(xiǎn)。本標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)目是通過(guò)化學(xué)合成法制備赭曲霉毒素A人工抗原，利用此抗原免疫實(shí)驗(yàn)動(dòng)物制備赭曲霉毒素A單克隆抗

4、體，基于此原料基礎(chǔ)上開(kāi)發(fā)赭曲霉毒素A快速檢測(cè)試紙條，再通過(guò)膠體金讀數(shù)儀進(jìn)行大米、玉米、小麥等樣品中赭曲霉毒素的定量分析。定量分析便于將檢測(cè)結(jié)果與國(guó)家限量對(duì)比，有助于監(jiān)管部門根據(jù)糧食的污染水平進(jìn)行糧食分級(jí)管理，同時(shí)有助于企業(yè)內(nèi)部更好地進(jìn)行質(zhì)量控制。本標(biāo)準(zhǔn)可提高糧食樣品檢測(cè)、監(jiān)測(cè)效率，降低成本，保護(hù)環(huán)境，保障從業(yè)人員健康安全。（二）背景據(jù)聯(lián)合國(guó)糧農(nóng)組織（FAO）統(tǒng)計(jì)，全世界每年谷物產(chǎn)量的25%受到真菌毒素不同程度的污染。隨著飼料工業(yè)的快速發(fā)展，近年來(lái)，中國(guó)的飼料也受到霉菌污染的嚴(yán)重挑戰(zhàn)。自2006年以來(lái)，玉米等飼料原料價(jià)格普遍上漲，致使很多飼料企業(yè)及養(yǎng)殖

5、戶使用低質(zhì)飼料原料，加上近年來(lái)氣候的變化，華北、東北地區(qū)降雨量增加，進(jìn)一步加重了飼料原料中真菌毒素的污染。而由于飼料原料和配合飼料中多種真菌毒素同時(shí)存在，在食用油等產(chǎn)品及牛奶中真菌毒素污染也比較嚴(yán)重。在世界許多地方，目前真菌毒素已構(gòu)成重要的食品安全問(wèn)題。真菌毒素對(duì)人類和動(dòng)物健康可產(chǎn)生嚴(yán)重的影響，這一認(rèn)識(shí)導(dǎo)致了許多國(guó)家在近幾十年來(lái)制定了諸多有關(guān)食品和飼料中真菌毒素的法規(guī)，以保護(hù)人類的健康，并保障生產(chǎn)者和貿(mào)易商的經(jīng)濟(jì)利益。隨著全球經(jīng)濟(jì)一體化的進(jìn)程，類似真菌毒素等涉及安全衛(wèi)生項(xiàng)目的限量標(biāo)準(zhǔn)，越來(lái)越多地被利用為貿(mào)易保護(hù)主義中非關(guān)稅壁壘的重要手段。因此，為了保

6、證食品安全，保障消費(fèi)者的健康，為了打破國(guó)外的技術(shù)壁壘，同時(shí)在合理有利的前提下，更多地樹(shù)立我國(guó)的技術(shù)性壁壘，開(kāi)展飼料中真菌毒素的檢測(cè)并建立標(biāo)準(zhǔn)方法是有效的方法之一。目前國(guó)內(nèi)應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法大多為儀器方法，所需儀器設(shè)備昂貴，不利于進(jìn)行廣泛推廣，并且限制了很多檢測(cè)單位高效、廣泛地開(kāi)展檢測(cè)工作。建立符合中國(guó)國(guó)情的快速檢測(cè)方法標(biāo)準(zhǔn)，具有檢測(cè)快速、簡(jiǎn)便、靈敏、成本低等優(yōu)點(diǎn)，為打開(kāi)市場(chǎng)并占領(lǐng)市場(chǎng)提供了先決條件。（三）限量標(biāo)準(zhǔn)、檢測(cè)方法及研究現(xiàn)狀1、限量標(biāo)準(zhǔn)世界各國(guó)均對(duì)食品中赭曲霉毒素A的含量做出了嚴(yán)格的規(guī)定。歐盟關(guān)于赭曲霉毒素A的限量標(biāo)準(zhǔn)分類最為詳細(xì)，未加5工谷物

7、為μg/kg，由未加工的谷物制備的所有產(chǎn)品，包括加工的谷物制品及直接供人食用的食物為3.0μg/kg，供嬰幼兒食用的谷類加工食品和嬰兒食品為0.5μg/kg。我國(guó)對(duì)食品中赭曲霉毒素A的限量標(biāo)準(zhǔn)（GB2761-2011）是：谷物及其制品≤5μg/kg；豆類及其制品≤5μg/kg。我國(guó)對(duì)飼料中赭曲霉毒素A的限量標(biāo)準(zhǔn)（GB13078.2-2006）是：配合飼料和玉米≤100μg/kg。表1我國(guó)飼料中的赭曲霉毒素A限量標(biāo)準(zhǔn)8產(chǎn)品名稱限量/(μg/kg)谷物及其加工產(chǎn)品≤100配合飼料≤1002、檢測(cè)方法及研究現(xiàn)狀真菌毒素的檢測(cè)方法主要有兩種，一是將色譜技術(shù)作

8、為基礎(chǔ)的物理化學(xué)檢測(cè)方法，包括高效液相色譜法（HPLC）和氣相色譜法（GC）等，而薄層層析法（TLC）由于操