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1、低溫對(duì)大鼠海馬腦片缺氧無(wú)糖損傷的保護(hù)作用及其與Glu受體的關(guān)系中國(guó)應(yīng)用生理學(xué)雜志2005;21(2)低溫對(duì)大鼠海馬腦片缺氧無(wú)糖損傷的保護(hù)作用及其與Glu受體的關(guān)系劉思蘭,王志萍,曾因明,江山,汪曙渠(1江蘇省蘇州市第四人民醫(yī)院麻醉科,江蘇蘇州215001);2江蘇省徐州醫(yī)學(xué)院麻醉學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,江蘇徐州221002)127摘要目的:探討低溫對(duì)離體大鼠海馬腦片缺氧無(wú)糖(oxygenandglucosedeprivation,OGD)損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制.方法:①觀察大鼠海馬腦片在OGD條件下順向群峰電位(orthodromicpopu
2、lationspike,OPS)的變化及溫度對(duì)它的影響.②觀察谷氨酸(Glu)對(duì)海馬腦片OPS的影響及低溫的抗Glu毒性作用.并在人工腦脊液(ACSF)中分別加入GABA—R的特異性阻滯劑bicuculline(BMI)和NMDA—R的特異性阻滯劑D一(一)一2-Amino-5一phospho—nopentanoicAcid(AP5)或加入BMI和非NMDA—R阻滯劑6,7-Dinitroquinoxaline一2,3(1H,4H)一dione(CNQX)來(lái)觀察低溫對(duì)海馬腦片OGD損傷保護(hù)作用的突觸后受體機(jī)制.③觀察OGDlh后海馬
3、CA1區(qū)錐體細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的變化及低溫對(duì)其的影響.結(jié)果:①OGD可以使海馬腦片OPS迅速降低并很快消失,14rain后復(fù)氧供糖OPS極少恢復(fù).低溫(32℃,25℃)能使OPS消失時(shí)間明顯延長(zhǎng),復(fù)氧供糖后OPS恢復(fù)良好.25℃其作用優(yōu)于32℃.②2mmol/LGlu使海馬腦片OPS迅速消失,洗出后難以恢復(fù).低溫(32℃,25℃)能顯著改善去Glulh后OPS的恢復(fù).ACSF中加入BMI+CNQX和BMI+AP5均對(duì)25℃低溫處理28min的腦保護(hù)作用沒有影響.③OGD1h后CA1區(qū)錐體細(xì)胞水腫嚴(yán)重.胞漿內(nèi)細(xì)胞器變性壞死脫失,線粒體腫脹,
4、脊呈空泡狀.低溫(25℃)組細(xì)胞核膜規(guī)則,線粒體輕度腫脹.結(jié)論:低溫有顯著的抗腦OGD損傷作用,其作用機(jī)制可能與抗Glu的興奮性毒性作用和維持細(xì)胞內(nèi)ATP水平有關(guān).而其抗興奮性毒性作用可能既有NMDA—R又有非NMDA—R的參與.關(guān)鍵詞:低溫;海馬腦片;缺氧無(wú)糖;順向群峰電位;谷氨酸中圖分類號(hào):R971文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A文章編號(hào):1000—6834(2005)02—0127—06自1950年Bigelow用15℃～20℃的深低溫使心臟與循環(huán)系統(tǒng)分離,并成功的施行了首例心臟手術(shù)以來(lái),低溫在心外科,神經(jīng)外科已得到廣泛應(yīng)用,并取得良好的腦保護(hù)
5、作用,但低溫的腦保護(hù)作用機(jī)制仍未闡明.而有關(guān)溫度對(duì)海馬OPS的影響國(guó)內(nèi)還鮮有報(bào)道.本實(shí)驗(yàn)利用海馬腦片OGD模型,從電生理學(xué)和細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)兩方面研究低溫的抗腦OGD損傷作用,旨在進(jìn)一步證實(shí)低溫的腦保護(hù)作用,并分析它可能的作用機(jī)制,為臨床應(yīng)用低溫防治缺血缺氧性腦損傷提供理論依據(jù).1材料與方法1,1材料S—D大鼠,雌雄不拘,50～70g,由徐州醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供.分析純Glu由上海華美公司提供.BMI,AP5,CNQX由美國(guó)Sigma公司提供.1.2離體海馬腦片的制備動(dòng)物在乙醚麻醉下,迅速斷頭取腦,置于0～4Z;經(jīng)95%O2～5%CO
6、2混合氣體飽和的ACSF中,剝離海馬,國(guó)產(chǎn)VSL振動(dòng)切片機(jī)沿矢狀面切片,厚度400m.然后將海馬腦片置于(32,0±0,5)℃的ACSF中孵育2～3h,并不斷通入95%O2～5%C()'混合氣體.ACSF成分:NaC1124mmol/L,KCl3.3mmol/L,Nail2PO41,24mmol/L,MgSO42,4mmol/L,NaHCO25.7mmol/L,CaCl22.4mmol/L,葡萄糖10.0mmol/L,pH7.35～7,45.1.3OPS的記錄將孵育后腦片全浸于(37.0±0.5)℃恒溫灌流槽內(nèi),液面高出腦片表面2m
7、m,不斷通入經(jīng)95%()'～5%CO,混合氣體飽和的ACSF(氣體流量為200ml/min),ACSF的灌流速度為1,5～2ml/min.雙極刺激電極置于海馬CA3區(qū)的Schaffer側(cè)支路徑上,刺激強(qiáng)度為0.2～0.8mA.玻璃微電極(內(nèi)充4mmol/LNaC1溶液,阻抗2～10MQ)置于CA1區(qū)錐體細(xì)胞層,記錄電刺激誘發(fā)的OPS.電位輸入電腦,HYD一2000電生理系統(tǒng)處理軟件進(jìn)行處理.選取電位波幅大于3mV的腦片,待OPS波形穩(wěn)定30min后進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn).1,4實(shí)驗(yàn)程序OGD:將灌流液改為經(jīng)95%N2～5%CO2混合氣體飽和的
8、無(wú)糖ACSF14min.Glu毒性實(shí)驗(yàn):用含Glu(2mmol/'L)的ACSF灌流腦片14min.BMI(50~mmol/L)+AP5(20t~mmol/L)和BMI(50~mmol/L)+CNQX(100~mmol/L)分別加入A
