生物藥物分析與檢驗(yàn)

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1、生物藥物分析與檢驗(yàn)生物藥物分析與檢驗(yàn)的特點(diǎn)：1.需要進(jìn)行相對(duì)分子質(zhì)量的測(cè)定、2.需要檢查生物活性3.需做安全性檢查4.需做效價(jià)測(cè)定5.要用生化法確證結(jié)構(gòu)終點(diǎn)測(cè)定法的條件：1.必須有專一地作用該被測(cè)物質(zhì)的酶，并能得到它的制品；2.能夠確定使這種酶反應(yīng)接近進(jìn)行完全的條件；3.反應(yīng)中底物的減少、產(chǎn)物的增加、輔酶物質(zhì)的改變等可以借助簡(jiǎn)便的方法進(jìn)行測(cè)定高效液相色譜法的定性分析1.利用已知物質(zhì)定性的方法①　利用保留特性②　利用不同柱比較2.色譜法與其他方法結(jié)合定性①　利用化學(xué)反應(yīng)定性②　利用選擇性檢測(cè)器定性③　液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)、液相色譜-核磁共振聯(lián)用技術(shù)生物檢定的范圍:1.藥物的效價(jià)測(cè)定

2、2.體內(nèi)微量生物活性物質(zhì)的測(cè)定3.中藥質(zhì)量的控制4.某些有害雜質(zhì)的限度檢查基因工程藥物的特點(diǎn)：1.分泌量極低而生理、藥理活性極高2.具有細(xì)胞和組織特異性3.多數(shù)細(xì)胞生長(zhǎng)因子具有多功能性4.細(xì)胞因子間存在復(fù)雜的相互作用5.具有低免疫原性特殊雜質(zhì)檢查方法：物理化學(xué)區(qū)分方法一、物理法“1.臭味及揮發(fā)性的差異2.顏色上的差異3.溶解行為上的差異二、化學(xué)分析法1.酸堿反應(yīng)2.呈色或沉淀反應(yīng)3.產(chǎn)生氣體4.氧化還原反應(yīng)免疫電泳技術(shù)：將瓊脂電泳與免疫擴(kuò)散結(jié)合起來，即利用電場(chǎng)作用下帶電蛋白質(zhì)在瓊脂凝膠中具有不同的遷移率，以及相同的蛋白質(zhì)具有完整的抗原性的特點(diǎn)，用于分析抗原或抗體性質(zhì)的一種技術(shù)。電泳

3、：帶電顆粒在電場(chǎng)的作用下，向著與其電性相反的電極移動(dòng)的現(xiàn)象。終點(diǎn)測(cè)定法：先借助酶反應(yīng)（單獨(dú)的反應(yīng)或幾種酶構(gòu)成的偶數(shù)酶反應(yīng)）使被測(cè)物質(zhì)定量地進(jìn)行轉(zhuǎn)變，然后在轉(zhuǎn)化完成后，測(cè)定底物、產(chǎn)物或輔酶物質(zhì)（第二底物）等的變化量生物檢定：利用生物體（整體動(dòng)物、離體組織/器官、細(xì)胞和微生物等）的作用以測(cè)定其效價(jià)或生物活性的一種方法。質(zhì)反應(yīng)：當(dāng)一定劑量的藥物注入動(dòng)物體內(nèi)后，觀察某一反應(yīng)或反應(yīng)的某一程度出現(xiàn)與否，只有質(zhì)的變化。量反應(yīng)：藥物對(duì)生物體所引起的反應(yīng)隨著藥物劑量的增加產(chǎn)生的量變可以測(cè)量者。雜志：指藥物中存在的無治療作用、或影響藥物穩(wěn)定性和療效、甚至對(duì)人體健康有害的物質(zhì)藥典主要包括凡例、正文、附錄

4、和索引四部分組成生物藥物常用的定量分析法：酶法、電泳法、免疫分析法、理化測(cè)定法、生物檢定法酶分析法包括酶法分析和酶活力測(cè)定酶聯(lián)免疫吸附分析法包括直接法和夾心法電泳法分為自由界面電泳、區(qū)帶電泳和高效毛細(xì)管電泳。指示液：溴酚藍(lán)用于指示電泳終點(diǎn)；甘油比重大，使樣品下沉SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳的三種效應(yīng)：分子篩效應(yīng)、濃縮效應(yīng)、電荷效應(yīng)高效液相色譜法的優(yōu)點(diǎn)：速度快、分辨率高、靈敏度高、柱子可反復(fù)使用、樣品容易回收要獲得較好色譜分離有兩個(gè)途徑：一是最大峰間的距離要大，二是色譜峰要窄常用的脫氣方法：真空脫氣法、煮沸脫氣法、溶劑的濾過微生物檢定法測(cè)定抗生素效價(jià)：稀釋法，濁度法，管碟法。其中我國(guó)是管

5、碟法。氯化物檢查法：用硝酸，硝酸銀硫酸鹽檢查法：用鹽酸，氯化鋇，標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照液：標(biāo)準(zhǔn)硫酸鉀溶液鐵鹽檢查法：中國(guó)藥典和美國(guó)藥典采用硫氰酸鹽，英國(guó)藥典采用巰基醋酸法重金屬檢查常用的顯色劑：硫代乙酰胺、硫化鈉澄清：不超過0.5號(hào)濁度標(biāo)準(zhǔn)液的濁度時(shí)；幾乎澄清：介于0.5號(hào)至1號(hào)濁度標(biāo)準(zhǔn)液之間胰島素的含量測(cè)定：高效液相色譜法；生物活性檢查：生物測(cè)定法；生物檢定法：小鼠血糖法、小鼠驚厥法、家兔血糖法氨基酸藥物分析的含量測(cè)底1.酸堿滴定法——谷氨酸、天冬氨酸、賴氨酸2.非水溶液滴定法——甘氨酸、絲氨酸、亮氨酸、、、、、3.定氮法——精氨酸和天冬酰胺4.碘量法或溴量法——鹽酸半胱氨酸、L-胱氨酸5.H

6、PLC或氨基酸自動(dòng)分析儀：谷丙甘氨酸膠囊等復(fù)方制劑蛋白質(zhì)藥物分析的含量測(cè)定1.定氮法——人胎盤的蛋白質(zhì)測(cè)定2.電泳法——人血白蛋白的純度測(cè)定3.高效液相色譜法——胰島素含量測(cè)定4.生物檢定法——硫酸魚精蛋白的效價(jià)測(cè)定葡萄糖酸鈣中蔗糖或還原糖類檢查用的試劑是堿性酒石酸銅試液蔗糖加硫酸煮沸后，用氫氧化鈉試液中和，再加亞硫酸鈉試液，產(chǎn)生紅色沉淀葡萄糖中存在的特殊雜質(zhì)為糊精取乳糖5.0g，加熱水25ml溶解，放冷，加硝酸汞試液5ml，5分鐘內(nèi)不得產(chǎn)生白色絮狀沉淀，這是檢查蛋白質(zhì)類雜質(zhì)葡萄糖注射液的含量測(cè)定方法為旋光度法用旋光度測(cè)定法測(cè)定葡萄糖氯化鈉注射液時(shí)，加入氨試液的作用加速D—葡萄糖α

7、和β兩種互變異構(gòu)體互變平衡的到達(dá)葡萄糖的Fehling反應(yīng)所需要的試劑是堿性酒石酸銅Keller-Kiliani反應(yīng)α-去氧糖的反應(yīng)洋地黃毒苷、地高辛（靛藍(lán)色）Kedde反應(yīng)不飽和內(nèi)酯的反應(yīng)去乙酰毛花苷（紅紫色）紙色譜地高辛1、葡萄糖注射液的鑒別反應(yīng)是Fehling反應(yīng)2、洋地黃毒苷的鑒別是Keller-Kiliani反應(yīng)3、去乙酰毛花苷的鑒別反應(yīng)是Kedde反應(yīng)4、用于地高辛鑒別和特殊雜質(zhì)檢查的方法PC特殊雜質(zhì)檢查洋地黃毒苷洋地黃皂苷（靈敏度法）地高辛洋地黃毒苷（P