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1、DC-CIK細胞的制備方法（僅供參考）【背景】?????CIK是“Cytokine-InducedKillerCells”的縮寫，中文全稱為“細胞因子誘導的殺傷細胞”。?CIK是單個核細?胞在CD3單抗和多種細胞因子(包括IFN-g,IL-2等)的作用下培養(yǎng)獲得的一群以CD3+CD56+細胞為主要效應(yīng)細?胞的異質(zhì)細胞群，其既具有T淋巴細胞強大的抗腫瘤活性，又具有NK細胞(自然殺傷細胞)的非MHC(主要組?織相容性抗原)限制性腫瘤殺傷能力。CIK細胞具有殺瘤活性高、殺瘤譜廣，對正常組織毒性低，體外可高度?擴增等特點，是目前臨床上廣泛使用的過繼性免疫治療細胞。??
2、??DC是“DendriticCells”的縮寫，中文全稱為“樹突狀細胞”，因其成熟時伸出許多樹突樣或偽足樣突起而?得名。DC是由2011年諾貝爾獎獲得者、加拿大籍科學家RalphM.Steinman于1973年發(fā)現(xiàn)的，是目前發(fā)現(xiàn)?的功能最強的抗原遞呈細胞(AntigenPresentingCells,APC)。已證實，DC是唯一能夠顯著刺激初始T細胞?(Na?ve??Tcells)增殖的APC，而其它APC(如單核巨噬細胞，B細胞等)僅能刺激已活化的或記憶性的T細胞。?DC是機體適應(yīng)性T細胞免疫應(yīng)答的始動者，在腫瘤免疫中具有極其重要的作用。?????DC-C
3、IK即DC和CIK細胞在體外共培養(yǎng)，然后回輸給患者。嚴格的說，最終的效應(yīng)細胞是經(jīng)DC體外活化?的CIK細胞。多項研究表明，DC與CIK具有協(xié)同作用，共同孵育后，DC表面共刺激分子的表達及抗原遞呈?能力均明顯提高，而CIK的增殖能力和體內(nèi)外細胞毒活性也得以增強，因此DC-CIK較單獨的CIK治療更為?有效。若將腫瘤抗原負載的DC與CIK共培養(yǎng)，可刺激產(chǎn)生腫瘤抗原特異性的T細胞，這樣的DC-CIK治療則?兼具特異性和非特異性雙重腫瘤殺傷作用，比未負載腫瘤抗原的DC刺激活化的CIK活性更強，常被用于臨?床和科研?！九囵B(yǎng)原理】1．DC培養(yǎng)用細胞因子：????GM-CS
4、F(粒細胞巨噬細胞集落刺激因子)：????GM-CSF是一種造血生長因子，在體外可刺激中性粒細胞和巨噬細胞的集落形成，并具有促進早期紅巨?核細胞、嗜酸性祖細胞增殖和發(fā)育的功能。GM-CSF是最早被鑒定出來對于DC有作用的細胞因子之一。GM-CSF在DC培養(yǎng)中的功能是促進單核細胞向大巨噬樣細胞分化，細胞表面MHCII類分子的表達得以提高，從而增強細胞的抗原遞呈功能。此外，GM-CSF還可促進DC的存活。????IL-4(白細胞介素-4)???IL-4在由單核細胞誘導成DC的過程中發(fā)揮的作用是抑制巨噬細胞的過度生長，從而引導單核細胞向DC?方向分化。若培養(yǎng)體系中不
5、加IL-4，單核細胞將分化為巨噬細胞。同時，IL-4還有降低細胞表面表達CD14?分子的能力。CD14表達水平的降低是單核細胞分化為DC的重要標志。????GM-CSF和IL-4共同作用可使單核細胞定向分化為未成熟DC(immatureDC)，此時的DC具有較強的抗原攝取和加工能力，但抗原遞呈能力很弱。細胞表面中度表達MHCI類、II類分子和B7家族分子(CD80,CD86?等)，但不表達CD14。????TNF-a(腫瘤壞死因子-a)????TNF-a可下調(diào)未成熟DC的巨胞飲作用和表面Fc受體的表達，使細胞內(nèi)MHCII類分子區(qū)室(classII???comp
6、artment)消失，但能夠上調(diào)細胞表面MHCI類、II類分子和B7家族分子(CD80,CD86等)的表達，使未成熟DC分化為成熟DC(matureDC)，此時DC的抗原攝取和加工能力明顯減弱，而抗原遞呈能力顯著增強，可極強的激活T細胞。2．CIK培養(yǎng)用細胞因子和抗體：????CD3激發(fā)型單抗：????T細胞活化的第一信號來自于T細胞表面的受體，即T細胞抗原受體(Tcellantigenreceptor,TCR)與APC提呈的抗原的特異性結(jié)合，也就是T細胞對抗原的特異性識別。TCR是由2條不同肽鏈構(gòu)成的異二聚體，在T細胞表面，其與CD3分子通過非共價鍵結(jié)合，形
7、成TCR/CD3復合體。TCR識別特異性抗原后會引起CD3和T細胞表面的輔助受體CD4或CD8分子的胞漿尾部聚集，進而激活與胞漿尾部相連的酪氨酸激酶(Lck,?Fyn和ZAP-70等)，促使CD3分子胞漿區(qū)的免疫受體酪氨酸活化基序(immunoreceptortyrosine-based?activationmotif,ITAM)中的酪氨酸(Y)磷酸化。磷酸化的酪氨酸(pY)進一步磷酸化下游含酪氨酸的蛋白，從而引起激酶活化的級聯(lián)反應(yīng)(磷脂酰肌醇途徑或MAP激酶途徑等)，最終通過激活轉(zhuǎn)錄因子，使其進入細胞核內(nèi)，結(jié)合于調(diào)控T細胞增殖和活化的靶基因(如IL-2和IF
8、N-g等)，引起基因的表達和轉(zhuǎn)錄，T細
