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《dc-cik細(xì)胞制備方法》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、DC-CIK細(xì)胞的制備方法（僅供參考）【背景】?????CIK是“Cytokine-InducedKillerCells”的縮寫，中文全稱為“細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞”。?CIK是單個(gè)核細(xì)?胞在CD3單抗和多種細(xì)胞因子(包括IFN-g,IL-2等)的作用下培養(yǎng)獲得的一群以CD3+CD56+細(xì)胞為主要效應(yīng)細(xì)?胞的異質(zhì)細(xì)胞群，其既具有T淋巴細(xì)胞強(qiáng)大的抗腫瘤活性，又具有NK細(xì)胞(自然殺傷細(xì)胞)的非MHC(主要組?織相容性抗原)限制性腫瘤殺傷能力。CIK細(xì)胞具有殺瘤活性高、殺瘤譜廣，對(duì)正常組織毒性低，體外可高度?擴(kuò)增等特點(diǎn)，是目前臨床上廣泛使用的過繼性免疫
2、治療細(xì)胞。????DC是“DendriticCells”的縮寫，中文全稱為“樹突狀細(xì)胞”，因其成熟時(shí)伸出許多樹突樣或偽足樣突起而?得名。DC是由2011年諾貝爾獎(jiǎng)獲得者、加拿大籍科學(xué)家RalphM.Steinman于1973年發(fā)現(xiàn)的，是目前發(fā)現(xiàn)?的功能最強(qiáng)的抗原遞呈細(xì)胞(AntigenPresentingCells,APC)。已證實(shí)，DC是唯一能夠顯著刺激初始T細(xì)胞?(Na?ve??Tcells)增殖的APC，而其它APC(如單核巨噬細(xì)胞，B細(xì)胞等)僅能刺激已活化的或記憶性的T細(xì)胞。?DC是機(jī)體適應(yīng)性T細(xì)胞免疫應(yīng)答的始動(dòng)者，在腫瘤免疫中具有極其重
3、要的作用。?????DC-CIK即DC和CIK細(xì)胞在體外共培養(yǎng)，然后回輸給患者。嚴(yán)格的說，最終的效應(yīng)細(xì)胞是經(jīng)DC體外活化?的CIK細(xì)胞。多項(xiàng)研究表明，DC與CIK具有協(xié)同作用，共同孵育后，DC表面共刺激分子的表達(dá)及抗原遞呈?能力均明顯提高，而CIK的增殖能力和體內(nèi)外細(xì)胞毒活性也得以增強(qiáng)，因此DC-CIK較單獨(dú)的CIK治療更為?有效。若將腫瘤抗原負(fù)載的DC與CIK共培養(yǎng)，可刺激產(chǎn)生腫瘤抗原特異性的T細(xì)胞，這樣的DC-CIK治療則?兼具特異性和非特異性雙重腫瘤殺傷作用，比未負(fù)載腫瘤抗原的DC刺激活化的CIK活性更強(qiáng)，常被用于臨?床和科研?！九囵B(yǎng)原理】
4、1．DC培養(yǎng)用細(xì)胞因子：????GM-CSF(粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子)：????GM-CSF是一種造血生長因子，在體外可刺激中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的集落形成，并具有促進(jìn)早期紅巨?核細(xì)胞、嗜酸性祖細(xì)胞增殖和發(fā)育的功能。GM-CSF是最早被鑒定出來對(duì)于DC有作用的細(xì)胞因子之一。GM-CSF在DC培養(yǎng)中的功能是促進(jìn)單核細(xì)胞向大巨噬樣細(xì)胞分化，細(xì)胞表面MHCII類分子的表達(dá)得以提高，從而增強(qiáng)細(xì)胞的抗原遞呈功能。此外，GM-CSF還可促進(jìn)DC的存活。????IL-4(白細(xì)胞介素-4)???IL-4在由單核細(xì)胞誘導(dǎo)成DC的過程中發(fā)揮的作用是抑制巨噬細(xì)胞的過
5、度生長，從而引導(dǎo)單核細(xì)胞向DC?方向分化。若培養(yǎng)體系中不加IL-4，單核細(xì)胞將分化為巨噬細(xì)胞。同時(shí)，IL-4還有降低細(xì)胞表面表達(dá)CD14?分子的能力。CD14表達(dá)水平的降低是單核細(xì)胞分化為DC的重要標(biāo)志。????GM-CSF和IL-4共同作用可使單核細(xì)胞定向分化為未成熟DC(immatureDC)，此時(shí)的DC具有較強(qiáng)的抗原攝取和加工能力，但抗原遞呈能力很弱。細(xì)胞表面中度表達(dá)MHCI類、II類分子和B7家族分子(CD80,CD86?等)，但不表達(dá)CD14。????TNF-a(腫瘤壞死因子-a)????TNF-a可下調(diào)未成熟DC的巨胞飲作用和表面Fc
6、受體的表達(dá)，使細(xì)胞內(nèi)MHCII類分子區(qū)室(classII???compartment)消失，但能夠上調(diào)細(xì)胞表面MHCI類、II類分子和B7家族分子(CD80,CD86等)的表達(dá)，使未成熟DC分化為成熟DC(matureDC)，此時(shí)DC的抗原攝取和加工能力明顯減弱，而抗原遞呈能力顯著增強(qiáng)，可極強(qiáng)的激活T細(xì)胞。2．CIK培養(yǎng)用細(xì)胞因子和抗體：????CD3激發(fā)型單抗：????T細(xì)胞活化的第一信號(hào)來自于T細(xì)胞表面的受體，即T細(xì)胞抗原受體(Tcellantigenreceptor,TCR)與APC提呈的抗原的特異性結(jié)合，也就是T細(xì)胞對(duì)抗原的特異性識(shí)別。T
7、CR是由2條不同肽鏈構(gòu)成的異二聚體，在T細(xì)胞表面，其與CD3分子通過非共價(jià)鍵結(jié)合，形成TCR/CD3復(fù)合體。TCR識(shí)別特異性抗原后會(huì)引起CD3和T細(xì)胞表面的輔助受體CD4或CD8分子的胞漿尾部聚集，進(jìn)而激活與胞漿尾部相連的酪氨酸激酶(Lck,?Fyn和ZAP-70等)，促使CD3分子胞漿區(qū)的免疫受體酪氨酸活化基序(immunoreceptortyrosine-based?activationmotif,ITAM)中的酪氨酸(Y)磷酸化。磷酸化的酪氨酸(pY)進(jìn)一步磷酸化下游含酪氨酸的蛋白，從而引起激酶活化的級(jí)聯(lián)反應(yīng)(磷脂酰肌醇途徑或MAP激酶途徑
8、等)，最終通過激活轉(zhuǎn)錄因子，使其進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi)，結(jié)合于調(diào)控T細(xì)胞增殖和活化的靶基因(如IL-2和IFN-g等)，引起基因的表達(dá)和轉(zhuǎn)錄，T細(xì)
