磷酸鹽緩沖液(pbs)配制方法

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1、實驗方案鑭鈰對銅脅迫下豌豆種子萌發(fā)和生長的影響1.La(Ⅲ)、Ce(Ⅲ)對重金屬脅迫下種子萌發(fā)影響的顯效劑量篩選(1)濃度梯度設計：LaCl3/CeCl3溶液配置：先配置1g?L-1的LaCl3/CeCl3溶液母液，然后將母液分別稀釋成濃度為5、10、20、40，60mg?L-1梯度濃度，調(diào)節(jié)PH（HCL/NAOH）至6.5，對照(CK)為PH調(diào)節(jié)至6.5的去離子水。重金屬Cuso4濃度的設置：10、25、50、100、200、400mg?L-1，對照用蒸餾水。(2)試材培養(yǎng)種子預處理：選取均勻飽滿的豌豆種子用0.1%HgCl2溶液消毒1

2、5min，分別用自來水和去離子水洗凈，常溫下晾干備用。（3）實驗設置：CK，La，Ce，Cu（共4組18個濃度57個樣品）（4）試材處理：選取LaCl3、CeCl3和CuSO4各個梯度溶液溶液，豌豆種子經(jīng)預處理后用各個梯度溶液浸沒處理，對照用蒸餾水，置于25±1℃浸種24h后，將處理后種子均勻排列在直徑9cm、墊有2層濾紙的培養(yǎng)皿中，每處理加入一定量水培養(yǎng)（以沒過種子2/3為標準），每處理3皿重復，每皿20粒。指標測定方法：種子發(fā)芽第三天測α—淀粉酶，第四天測發(fā)芽勢，前三天測發(fā)芽指數(shù)和發(fā)芽率，第五天測量根長、莖長，第六天測根系活力、葉綠素

3、含量、可溶性蛋白質(zhì)、可溶性糖、SOD、POD、CAT、MDA.2．La(Ⅲ)和Ce(Ⅲ)對重金屬脅迫下種子萌發(fā)及保護酶的影響(1)試材培養(yǎng)種子預處理：選取均勻飽滿的豌豆種子用0.1%HgCl2溶液消毒15min，分別用自來水和去離子水洗凈，常溫下晾干備用。（2）實驗設置：在上一步驟中分別篩選出LaCl3、CeCl3的低劑量、適宜劑量、高劑量三個有效濃度和CuSO4的一個有效濃度，分別記為A1，A2，A3；B1，B2，B3；C。（3）實驗步驟：有以下幾組：A+C:A1+C、A2+C、A3+CB+C:B1+C、B2+C、B3+CA+B+C：A

4、1+B1+C、A1+B2+C、A1+B3+C、A2+B1+C、A2+B2+C、A2+B3+C、A3+B1+C、A3+B2+C、A3+B3+C酸鹽緩沖液（PBS）配制方法磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉緩沖液（0.2M）pH0.2MNa2HPO4/ml0.2MNaH2PO4/ml7.061.039.07.789.510.57.891.58.5Na2HPO4·2H2O分子量＝178.050.2M溶液含35.61g/LNa2HPO4·12H2O分子量＝358.220.2M溶液含71.64g/LNaH2PO4·H2O分子量＝138.010.2M溶液含27.

5、6g/LNaH2PO4·2H2O分子量＝156.030.2M溶液含31.21g/L0.01MPBS?PBS(135mMNaCl,2.7mMKCl,1.5mMKH2PO4,and8mMK2HPO4，pH7.2)PBS緩沖液（pH7.2～7.4）：NaCl137mmol/L，KCl2.7mmol/L，Na2HPO44.3mmol/L，KH2PO41.4mmol/L稱7.9gNaCl，0.2gKCl，0.24gKH2PO4(or1.44gNa2HPO4)和1.8gK2HPO4，溶于800ml?蒸餾水中，用HCl調(diào)節(jié)溶液的pH值至7.4，最后加蒸

6、餾水定容至1L。保存于4℃冰箱中即可。母液的配制：?0.2MNa2HPO4：稱取71.6gNa2HPO4-12H2O，溶于1000ml水0.2MNaH2PO4：稱取31.2gNaH2PO4-2H2O，溶于1000ml水各種濃度PB(pH=7.4)的配制：先配0.2MPB(pH=7.4，100ml)：取19ml0.2mol/L的NaH2PO4，?81ml0.2mol/L的Na2HPO4,即可。然后只需將0.2MPB(pH=7.4)按相應比例適當稀釋即可，如：0.1MPB（PH=7.4）：取500ml0.2MPB，加水稀釋至1000ml即可。

7、0.01MPB（PH=7.4）：取50ml0.2MPB，加水稀釋至1000ml即可。0.02MPB（PH=7.4）：取100ml0.2MPB，加水稀釋至1000ml即可。?若需要NaCl的話，加入NaCl至0.9%（g/100ml）即可。另：其它各種另PH值的0.2MPB（100ml)配方：pH??????0.2MNaH2PO4（ml）????????0.2MNa2HPO4（ml）7.0?????????????38???????????????????????????627.8?????????????8.5??????????????

8、???????????91.5?0.01M磷酸鹽緩沖液（PBS）配制方法稱取8gNaCl、0.2gKCl、1.44gNa2HPO4和0.24gKH2PO4,溶于800ml蒸餾水中，用HCl調(diào)節(jié)