菠菜中提取葉綠素

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1、實驗菠菜色素的提取和色素分離（extractionofpigmentsfromspinachandchromagraphicisolation）【實驗?zāi)康摹浚?）通過綠色植物色素的提取和分離，了解天然物質(zhì)分離提純方法；（2）通過薄層色譜分離操作，加深了解微量有機物色譜分離鑒定的原理；（3）從菠菜中提取出葉綠素、胡蘿卜素、葉黃素等色素并加以分離?！緦嶒炘怼可V法利用混合物中各組分在某一物質(zhì)中的吸附或溶解性能（即分配）的不同，或其它親和作用性能的差異，使混合物的溶液流經(jīng)該種物質(zhì)，進行反復(fù)的吸附或分配等作用，從而將各組分

2、分開。薄層色譜法是其中一種微量快速的分析分離方法。它具有靈敏、快速準確等優(yōu)點。薄層色譜屬于固-液吸附層析的類型。通常是把吸附劑放在玻璃板上成為一個薄層，作為固定相，以有機溶劑作為流動相。實驗時，把要分離的混合物滴在薄層板的一端，用適當?shù)娜軇┱归_。當溶劑流經(jīng)吸附劑時，由于各物質(zhì)被吸附的強弱不同，就以不同的速率隨著溶劑移動。展開一定時間后，讓溶劑停止流動，混合物中各組分就停留在薄層板上顯示出一個個色斑的色譜圖。若各組分無色，可噴灑一定的顯色劑使之顯色（如圖）。混合物中各物質(zhì)在薄板上隨溶劑移動的相對距離稱為比移值（Rf值）

3、。如下圖中：??????????????。╝）原板（b）已展開層析板圖?薄層色譜裝置圖??????圖?薄層色譜效果圖在一定條件下，各物質(zhì)具有一定的Rf值。不同物質(zhì)在相同條件下，具有不同的Rf值。因此，可利用Rf值對物質(zhì)進行定性鑒定。但物質(zhì)的Rf值常因吸附劑的種類和活性、薄層的厚度、展開劑及溫度等的不同而異。所以在鑒定樣品時，常用已知成分作對照試驗，在同一個薄層板上進行層析，然后通過Rf值的比較，對物質(zhì)作定性鑒定。根據(jù)斑點的面積大小和顏色的深淺的標準物的對照下還可進行定量?；衔锏奈叫耘c其極性成正比，化合物分子中含有

4、極性較大的基團時吸附性也較強。展開劑（溶劑）的極性越大，則對化合物的洗脫力越大，則Rf越大（如果樣品在溶劑中有一定的溶解度）。綠色植物如菠菜葉中含有葉綠素（綠）、胡蘿卜素（橙）和葉黃素（黃）等多種天然色素。本實驗從菠菜中提取上述幾各色素，并通過薄層層析進行分離。3葉綠素存在兩種結(jié)構(gòu)相似的形式——葉綠素a（C55H72O5N4Mg）以及葉綠素b（C55H70O6N4Mg），其差別僅是a中一個甲基被b中的甲酰基所取代。它們都是吡咯衍生物與金屬鎂的絡(luò)合物，是植物進行光合作用所必需的催化劑。植物中葉綠素a的含量通常是b的3倍

5、。盡管葉綠素分子中含有一些極性基團，但大的烴基結(jié)構(gòu)使它易溶于醚、石油醚等一些非極性的溶劑。胡蘿卜素（C40H56）是具有長鏈結(jié)構(gòu)的共軛多烯。它有三種異構(gòu)體，即a-,β-和γ-胡蘿卜素，其中β-異構(gòu)體含量最多，也最重要。在生物體內(nèi)，β-體受酶催化氧化即形成維生素A。目前β-胡蘿卜素已可進行工業(yè)生產(chǎn)，可作為維生素A使用，也可作為食品工業(yè)中的色素。葉黃素（C40H56O2）是胡蘿卜素的羥基衍生物，它在綠葉中的含量通常是胡蘿卜素的兩倍。與胡蘿卜素相比，葉黃素較易溶于醇而在石油醚中溶解度較小。葉綠素a（R=CH3）葉綠素b（R

6、=CHO）β-胡蘿卜素（R=H）葉黃素（R=OH）維生素A【實驗試劑】20g菠菜葉，20mL甲醇，40mL石油醚（60~90℃）－甲醇（3:2）溶液，硅膠G，0.5%羧甲基纖維素鈉，無水硫酸鈉，石油醚－丙酮（8:2），石油醚－乙酸乙酯（6:4）【實驗步驟】1、薄層板的制備取四塊顯微載玻片，洗凈晾干。在小燒杯中，放置3.0g硅膠，逐漸加入0.5%羧甲基纖維素鈉水溶液6~7mL，調(diào)成均勻的糊狀，其稀稠為在震動下可流動，倒在潔凈的載玻片上，用食指和拇指拿住玻璃板，前后左右振搖、擺動，并不時轉(zhuǎn)動方向，制成薄厚均勻、表面光潔平

7、整、無氣泡的薄層板，厚度為0.25~1.0mm。涂好后的硅膠G薄層板置于水平的玻璃板上，在室溫下放置0.5h后（注意：室溫放置必須使玻板干透，否則會出現(xiàn)斷裂現(xiàn)象），放入烘箱中緩慢升溫至110℃，恒溫0.5~1h后取出，稍冷備用。2菠菜色素的提取稱取20g洗凈用濾紙吸干的的新鮮（或冷凍）的菠菜葉，用剪刀剪碎并與20mL甲醇拌勻，在研缽中研磨約5min然后用布氏漏斗抽濾菠菜汁，棄去濾液。將菠菜汁放回研缽，每次用20mL3:2（體積比）的石油醚-甲醇混合液萃取兩次，每次需加以研磨充分并且抽濾。3注意：因石油醚易揮發(fā)，抽濾時

8、先倒少許清液浸潤濾紙，抽濾時真空度不要太大！合并濾液，用吸管取上層深綠色萃取液，轉(zhuǎn)入分液漏斗，每次用10mL水洗滌兩次，以除去萃取液中的甲醇。洗滌時要輕輕旋蕩，以防止產(chǎn)生乳化。棄去水—甲醇層，石油醚層用無水硫酸鈉干燥30min后，濾入圓底燒瓶（勿將干燥劑濾入），在水浴上蒸去大部分石油醚至體積約為1mL為止。石油醚回收。3、點樣取活化后的層析板，