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1、HPLC法測定鎮(zhèn)咳寧顆粒中白花前胡甲素的含量作者：汪保國陳思東周衛(wèi)平原素林雪穎【摘要】目的建立復(fù)方制劑鎮(zhèn)咳寧顆粒中白花前胡甲素的含量測定方法。方法采用高效液相色譜法采用phenomenexlunaC18色譜柱，乙腈－水梯度洗脫；檢測波長：321nm；柱溫：26℃。結(jié)果白花前胡甲素在0.185ug～3.7ug范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，r＝1；回收率99.62％，RSD為0.37％。結(jié)論本測定方法簡便可行、重復(fù)性好，可用于本制劑中的質(zhì)量控制?！娟P(guān)鍵詞】鎮(zhèn)咳寧顆粒白花前胡甲素含量測定鎮(zhèn)咳寧顆粒由前胡、紫菀、枳殼等多味中藥組成，具散風(fēng)清熱，
2、化痰止咳之功。用于治療風(fēng)熱咳嗽，痰多，喘滿等癥狀。前胡為方中君藥，具有散風(fēng)清熱、降氣化痰等功效，其主要含有多種類型的香豆素及其糖苷[1]，文獻報道白花前胡甲素是前胡藥材的代表性成分[2－4]。本方參照藥典［5］選用白花前胡甲素作為指標(biāo)成分，采用HPLC法測定白花前胡甲素的含量。1儀器與試藥Aiglent1100高效液相色譜儀(美國Aiglent公司，配有自動進樣器，柱溫箱，二級管陳列檢測器（DAD），四元（型號）泵，Aiglent-Chemstation化學(xué)工作站。鎮(zhèn)咳寧顆粒(批號：20080115、20080116、2008
3、0117)，由廣州中醫(yī)藥大學(xué)新藥開發(fā)研究中心提供；陰性對照樣品(自制)；白花前胡甲素(供含量測定用，110753-200413)，由中國藥品生物制品檢定所提供。乙腈為色譜純，液相用水為超純水，其余試劑為分析純。2方法與結(jié)果2.1色譜條件phenomenexlunaC18(250mm×4.6mm,5um)為固定相；流動相乙腈為流動相A，水為流動相B，按下表進行梯度洗脫(表1)；流速：1mL／min；檢測波長為321nm；柱溫：26℃；進樣量：10uL。在該色譜條件下，白花前胡甲素峰可達基線分離，其它藥材成分對測定無干擾，結(jié)果見圖
4、1。表1流動相梯度洗脫時間表白花前胡甲素對照品復(fù)方供試品缺前胡陰性對照圖1HPLC色譜圖2.2對照品溶液的制備精密稱取白花前胡甲素對照品適量，加甲醇溶解定容，制成濃度為0.185mg/mL的白花前胡甲素對照品溶液。2.3供試品溶液的制備取樣品適量，研細，取細粉0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中,精密加入80%乙醇50ml,稱定重量,超聲處理（250W，40kHz）30分鐘,放冷，再稱定重量,用80%乙醇補足減失的重量,搖勻,微孔濾膜濾過,取續(xù)濾液，作為供試品溶液。2.4線性關(guān)系考察3分別精密吸取對照品溶液1,2,4，8,l0,
5、l2,16,20uL進行色譜測定，按上述色譜條件測定峰面積，以對照品進樣質(zhì)量(X，ug)對峰面積(Y，mAu．Sec)進行線性回歸，求得回歸方程為：Y=1095.7X-1.4585，r=1，線性范圍0.185ug～3.7ug。（見表2）表2白花前胡甲素標(biāo)準曲線的測定2.5精密度試驗精密吸取對照品溶液10uL，連續(xù)進樣6次，測得峰面積積分值。白花前胡甲素平均峰面積為2031.53，RSD為1.28％。結(jié)果表明儀器精密度良好。2.6穩(wěn)定性試驗精密吸取同一供試品溶液10uL，于0，2，4，8，12h進樣測定。白花前胡甲素平均峰面積為
6、1052.07，RSD為2.15％。表明供試品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定。2.7重復(fù)性試驗取同一批次樣品(20080115)，按供試品溶液制備項下操作，平行制備6份，按上述色譜條件測定含量，結(jié)果白花前胡甲素平均含量為0.8012mg/g，RSD為1.57%。結(jié)果表明本方法重復(fù)性良好。2.8加樣回收率試驗同一批次已知含量的鎮(zhèn)咳寧顆粒(20080115)適量，研細，取細粉約0.5g，精密稱定，精密加入一定量的白花前胡甲素對照品，按供試品溶液制備項下操作，重復(fù)操作6份，按上述色譜條件測定含量，計算回收率，結(jié)果見表3。結(jié)果表明該方法具有良好的
7、回收率。表3加樣回收試驗結(jié)果（n＝6）2.9樣品測定精密稱取鎮(zhèn)咳寧顆粒0.5g，按樣品制備方法制備供試品溶液，精密吸取供試品溶液注入液相色譜儀中，測定含量。共測定3批，結(jié)果見表4。表4鎮(zhèn)咳寧顆粒含量測定結(jié)果（n＝3）3討論3.1供試品溶液制備方法曾考察提取方法(超聲、回流)、提取溶劑（50％乙醇、80％乙醇、甲醇）、提取溶媒量(50倍量、100倍量、200倍量)、提取時間(15min、30min、45min)。加熱回流與超聲處理樣品，兩者提取的白花前胡甲素含量相差不大，從操作簡便角度考慮，確定提取方法為超聲提??；三種不同溶媒進
8、行提取，白花前胡甲素含量無差異。80%乙醇提取液更為澄清，容易濾過，因此提取溶媒選用80%乙醇；溶媒用量為100倍量和200倍量時提取效果差異不大，均高于50倍量時的提取效果，因此選擇溶媒用量為100倍量。超聲處理30min與45min結(jié)果近似，略高于超聲處理15min，因此
