資源描述：
《小鼠早期胚發(fā)育全程微分干涉差顯微觀察_論文》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、小鼠早期胚發(fā)育全程微分干涉差顯微觀察【摘要】目的對小鼠早期胚發(fā)育全程進(jìn)行系統(tǒng)的微分干涉差顯微觀察并制成圖譜。方法通過體外受精和體內(nèi)受精方法獲得小鼠卵母細(xì)胞和早期胚胎,利用倒置微分干涉差顯微鏡觀察排卵前卵母細(xì)胞至擴(kuò)展囊胚的早期胚發(fā)育全過程,數(shù)碼顯微攝影系統(tǒng)拍照。結(jié)果記錄排卵前卵母細(xì)胞至擴(kuò)展囊胚的小鼠早期胚發(fā)育全過程,制成微分干涉差顯微圖譜。結(jié)論微分干涉差顯微鏡觀察卵母細(xì)胞和各階段早期胚,立體感強(qiáng)，對比度適當(dāng),可以準(zhǔn)確生動地顯示微細(xì)結(jié)構(gòu),所形成的圖譜可供胚胎培養(yǎng)與操作借鑒。【關(guān)鍵詞】小鼠;胚胎發(fā)育;微分干涉差顯微術(shù)ABSTRACT:ObjectiveToobserv
2、esystematicallyandsetuptheatlasofthewholedevelopmentalprocessofmousepreimplantationembryonicoocytewithdifferentialinterferencecontrast(DIC)microscopy(DIC).MethodsMouseoocytesandpreimplantationembryoswerederivedfrominvitroorinvivofertilization.Thefulldevelopmentalstagesfrompreovulator
3、yoocytetoexpandedblastocystofmouseembryoswereobservedbyinvertedDICmicroscope,andphotosweretakenby12/12digitalmicrophotography.ResultsADICatlasofpreimplantationembryosinfulldevelopmentalstageswasformedfrompreovulatoryoocytetoexpandedblastocyst.ConclusionDICtechniqueofferedastereoandfi
4、neimageofcell/embryoindifferentstages.Theatlasmadefromthisobservationcanbeusedforreferencetothosewhoneedstocultureandmanipulatemouseembryos.KEYWORDS:mice;embryonicdevelopment;differentialintereferenceconstrastmicroscopy隨著功能基因組學(xué)時(shí)代的到來,轉(zhuǎn)基因小鼠、基因打靶(尤其是其中的基因敲除)小鼠、克隆小鼠技術(shù)和小鼠胚胎干細(xì)胞工程等,已經(jīng)成為生命科學(xué)
5、各前沿領(lǐng)域普遍采用的研究手段。在這些研究中,使用微分干涉差顯微鏡(differentialinterferencecontrastmicroscope,DIC)技術(shù)，對小鼠的早期胚進(jìn)行細(xì)致的觀察與操作是不可或缺的關(guān)鍵步驟［1］。筆者對小鼠體內(nèi)發(fā)育或體外受精形成的早期胚各個(gè)階段,用DIC顯微鏡進(jìn)行系統(tǒng)觀察并實(shí)時(shí)攝影,形成小鼠早期胚發(fā)育全過程圖譜,為推廣小鼠胚胎操作技術(shù),促進(jìn)基因功能研究提供實(shí)用的基礎(chǔ)資料。1材料與方法材料12/12動物SPF級ICR小鼠,3周齡雌鼠,體質(zhì)量15~18g;性成熟雌鼠、雄鼠,體質(zhì)量30~35g［上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動物有限責(zé)任公司,許可證號:
6、SCXK(滬)2017-0003］,雌鼠52只,雄鼠12只。主要試劑孕馬血清（PMSG1000IU/瓶,杭州動物藥品廠);人絨毛膜促性腺激素（hCG1000IU/瓶）,麗珠集團(tuán)麗珠制藥廠);M2培養(yǎng)基、M16培養(yǎng)基:參照文獻(xiàn)［1］配制;KSOM＋AA培養(yǎng)基［2］(EmbryoMax,美國Chemicon公司);礦物油(EmbryoCultureTested,M-8410,美國Sigma公司)。主要儀器倒置顯微操作系統(tǒng)(TE-2000U型,日本Nikon公司);數(shù)碼顯微攝影系統(tǒng)(DP-70型,日本Olympus公司);三氣培養(yǎng)箱(3131型,美國Thermo公司)
7、;體視顯微鏡(SZX7型,日本Olympus公司);雙人單面凈化工作臺(SW-CJ-1Cu型,蘇州凈化設(shè)備有限公司)。方法小鼠超數(shù)排卵選用3周或性成熟ICR雌鼠為供卵/胚鼠。用于體外受精的小鼠于第1天17-18時(shí)腹腔注射PMSGIU,48h后腹腔注射hCGIU,待用;用于體內(nèi)受精的ICR雌鼠于第1天12時(shí)左右腹腔注射PMSGIU,48h后腹腔注射hCG12/12IU,熄燈(20時(shí))前與性成熟雄鼠合籠,自然交配,第4天8時(shí)左右檢查雌鼠,選有陰道栓者待用。排卵前卵母細(xì)胞采集與處理選取經(jīng)超數(shù)排卵后而未受精的雌鼠,斷頸處死,從腰背部打開腹腔,取出卵巢,在M2培養(yǎng)液中用解
8、剖針刺破卵巢上突出的卵泡
