tcid50的測(cè)定方法

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1、實(shí)驗(yàn)病毒感染力的滴定（TCID50的測(cè)定）滴度：在半定量或定量測(cè)定中，將標(biāo)本作一系列稀釋后進(jìn)行試驗(yàn)，呈陽(yáng)性反應(yīng)的最高稀釋度即為滴度。根據(jù)滴度的高低，可以判斷標(biāo)本反應(yīng)性的強(qiáng)弱。滴度（抗體的多少）越高，受傳染的機(jī)會(huì)就越小。一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康牧私獠《靖腥玖y(cè)定的幾種常用方法，掌握半數(shù)細(xì)胞培養(yǎng)物感染量TCID50的操作步驟、計(jì)算方法及含義。二、測(cè)定病毒感染力的方法半數(shù)致死量LD50(50%lethaldose)：用動(dòng)物或雞胚來(lái)檢測(cè)半數(shù)雞胚感染量EID50(egg50%infectivedose)：用雞胚來(lái)檢測(cè)半數(shù)細(xì)胞培養(yǎng)物

2、感染量TCID50（50%tissuecultureinfectivedose)：用細(xì)胞來(lái)檢測(cè)蝕斑形成單位（plaqueformingunit，PFU）：用細(xì)胞來(lái)檢測(cè)三、材料1、長(zhǎng)滿單層的細(xì)胞1瓶2、胰酶、吸球、吸管、生長(zhǎng)液3、96孔細(xì)胞培養(yǎng)板4、加樣器、槍頭5、病毒液（PRV）四、TCID50的操作步驟1、在離心管中用MEM將病毒液作連續(xù)10倍的稀釋，從10-1-10-6。2、將稀釋好的病毒接種到96孔培養(yǎng)板中，每一稀釋度接種一縱排，共8孔，每孔接種100μl。3、在每孔加入細(xì)胞懸液100μl，使細(xì)胞量達(dá)到

3、2~3×105個(gè)/ml。4、設(shè)正常細(xì)胞對(duì)照，正常細(xì)胞對(duì)照作兩縱排。（100μl生長(zhǎng)液+100μl細(xì)胞懸液）5、逐日觀察并記錄結(jié)果，一般需要觀察5-7天。6、結(jié)果的計(jì)算，按Reed-Muench兩氏法或Karber法。五、TCID50的計(jì)算方法1、Reed-Muench兩氏法病毒液稀釋度出現(xiàn)CPE孔數(shù)無(wú)CPE孔數(shù)累計(jì)出現(xiàn)CPE孔所占的%CPE孔數(shù)無(wú)CPE孔數(shù)10-180270100（27/27）10-280190100（19/19）10-37111191.6（11/12）10-4354640（4/10）10-5

4、171130.7（1/14）10-6080210（0/21）（CPE：Cytopathiceffect細(xì)胞病變影響）距離比例＝（高于50%病變率的百分?jǐn)?shù)-50%）/（高于50%病變率的百分?jǐn)?shù)-低于50%病變率的百分?jǐn)?shù)）?＝（91.6-50）/（91.6-40）＝0.8lgTCID50=距離比例×稀釋度對(duì)數(shù)之間的差+高于50%病變率的稀釋度的對(duì)數(shù)=0.8×(-1)+(-3)=-3.8TCID50=10-3.8/0.1ml含義：將該病毒稀釋103.8接種100μl可使50%的細(xì)胞發(fā)生病變。2、Karber法病毒液

5、稀釋度出現(xiàn)CPE的孔數(shù)出現(xiàn)CPE孔的比率10-188/8=110-288/8=110-377/8=0.87510-433/8=0.37510-511/8=0.12510-600/8=0lgTCID50=L-D(S-0.5)L：最高稀釋度的對(duì)數(shù)D：稀釋度對(duì)數(shù)之間的差S：陽(yáng)性孔比率總和lgTCID50=-1-1×(3.375-0.5)=-3.875TCID50=10-3.875/0.1ml含義：將該病毒稀釋103.875接種100μl可使50%的細(xì)胞發(fā)生病變。