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1、36-奶粉中三聚氰胺的測(cè)定奶粉中三聚氰胺的測(cè)定奶粉中三聚氰胺的測(cè)定1原理三聚氰胺是一種三嗪類含氮雜環(huán)有機(jī)化合物,微溶于水,可溶于甲醇、甲醛、乙酸、熱乙二醇、甘油、吡啶等。本方法采用20%甲醇溶解樣品,5%三氯乙酸沉淀蛋白,提取樣品中的三聚氰胺,經(jīng)液相色譜儀C18柱分離,檢測(cè)波長(zhǎng)235nm條件下進(jìn)行檢測(cè)。2試劑使用優(yōu)級(jí)純、色譜純?cè)噭?,色譜用水符合GB/t6682一級(jí)水的規(guī)定。2.120%甲醇溶液:甲醇+水(2+8)2.25%三氯乙酸溶液:稱取三氯乙酸5g溶解于100ml水中。2.3乙腈2.4混合液:稱取2.10g一水合檸檬酸和1.88克己烷磺酸鈉,溶于水中,稀釋至1000m
2、l混勻。2.5流動(dòng)相:混合液(2.4)+乙腈(2.3)=92+8。2.6標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液配制:準(zhǔn)確稱取三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)品0.1000g,用20%甲醇溶液(2.1)定容至100ml。三聚氰胺含量為1.00mg/毫升,于4℃冰箱內(nèi)避光保存。2.7三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)系列的配制:準(zhǔn)確吸取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(2.6)0.100ml;1.00ml;2.50ml;5.00ml;10.00ml至100ml容量瓶中,并用20%甲醇溶液(2.1)定容至刻度。配制成三聚氰胺濃度分別為1.00mg/L;10.0mg/L;25.0mg/L;50.0mg/L;100mg/L的標(biāo)準(zhǔn)系列。3儀器和設(shè)備3.1液相色譜儀:附二級(jí)管
3、陣列檢測(cè)器(爸爸)或紫外檢測(cè)器(UV)3.2超聲波清洗器3.3超速離心機(jī)3.4渦旋混合器3.5濾膜:0.45μ4分析步驟4.1試樣處理:將奶粉樣品混勻,準(zhǔn)確稱取樣品1~5g于50ml比色管中,加入20%甲醇溶液(2.1)約35ml,震蕩混勻,超聲提取5min,加入5%三氯乙酸(2.2)5ml,并用20%甲醇溶液(2.1)定容至刻度,搖勻。以為3000rpm/min時(shí)超速離心5min。取上清液經(jīng)0.45μM濾膜過濾,備用4.2色譜參考條件4.2.1流動(dòng)相:10mmol/L己烷磺酸鈉+10mmol/L檸檬酸∶乙腈=92∶8;4.2.2流速:1.0ml/min;4.2.3柱溫:
4、35℃;4.2.4檢測(cè)器:二極管陣列檢測(cè)器(爸爸)或紫外檢測(cè)器(UV),波長(zhǎng)235nm;4.2.5色譜柱:C18柱子250mm×4.6毫米,5μM;4.2.6進(jìn)樣量:10~20μ4.3色譜分析:進(jìn)樣10~20μL標(biāo)準(zhǔn)使用液及樣品處理液于高效液相色譜儀中,以保留時(shí)間及光譜定性,以樣品峰面積與標(biāo)準(zhǔn)系列比較定量5結(jié)果計(jì)算樣品中三聚氰胺含量按下列公式進(jìn)行計(jì)算。式中:X樣品中三聚氰胺的含量,單位為毫克每千克(毫克/公斤);C從曲線上查出樣品中三聚氰胺濃度,單位為毫克每升(毫克/升);V-thetotalvolumeinthesampleisinml(mL);M-samplequal
5、ity,unitisgram(g).6chromatogramFigure1melaminestandardhighperformancechromatogram(1-melamine)Figure2UVabsorptionspectrumofmelaminestandardFig.3liquidchromatographyofmelamineinmilkpowdersamples(1-melamine)Fig.4ultravioletabsorptionspectrumofmelamineinmilkpowdersample7finedensityTheabsolute
6、differencebetweenthetwoindependentmeasurementsobtainedunderrepeatedconditionsshouldnotexceed10%ofthearithmeticmean.8other8.1standardcurveandlinearrangeUndertheaboveexperimentalconditions,thestandardcurvesofmelamineconcentrationwere0.911,9.11,22.8,45.6and91.1mg/Lrespectively.Thestandardcur
7、vewasdrawnbycomparingthepeakareaandtheconcentration:Linearequationsandcorrelationcoefficients:A=81.7c+56.3,r=0.9999Formula:A-peakarea;c-concentration,inunitsofmilligramsperliter(mg/L)8.2methodminimumdetectionlimitTheminimumdetectionlimitofthismethodis5mg/kg,suchasre