-奶粉中三聚氰胺的測(cè)定

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1、36-奶粉中三聚氰胺的測(cè)定奶粉中三聚氰胺的測(cè)定奶粉中三聚氰胺的測(cè)定1原理三聚氰胺是一種三嗪類含氮雜環(huán)有機(jī)化合物，微溶于水，可溶于甲醇、甲醛、乙酸、熱乙二醇、甘油、吡啶等。本方法采用20%甲醇溶解樣品，5%三氯乙酸沉淀蛋白，提取樣品中的三聚氰胺，經(jīng)液相色譜儀C18柱分離，檢測(cè)波長(zhǎng)235nm條件下進(jìn)行檢測(cè)。2試劑使用優(yōu)級(jí)純、色譜純?cè)噭?，色譜用水符合GB/t6682一級(jí)水的規(guī)定。2.120%甲醇溶液：甲醇+水（2+8）2.25%三氯乙酸溶液：稱取三氯乙酸5g溶解于100ml水中。2.3乙腈2.4混合液：稱取2.10g一水合檸檬酸和1.88克己烷磺酸鈉，溶于水中，稀釋至1000m

2、l混勻。2.5流動(dòng)相：混合液（2.4）+乙腈（2.3）=92+8。2.6標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液配制：準(zhǔn)確稱取三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)品0.1000g，用20%甲醇溶液（2.1）定容至100ml。三聚氰胺含量為1.00mg/毫升，于4℃冰箱內(nèi)避光保存。2.7三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)系列的配制：準(zhǔn)確吸取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（2.6）0.100ml；1.00ml；2.50ml；5.00ml；10.00ml至100ml容量瓶中，并用20%甲醇溶液（2.1）定容至刻度。配制成三聚氰胺濃度分別為1.00mg/L；10.0mg/L；25.0mg／L；50.0mg／L；100mg/L的標(biāo)準(zhǔn)系列。3儀器和設(shè)備3.1液相色譜儀：附二級(jí)管

3、陣列檢測(cè)器（爸爸）或紫外檢測(cè)器（UV）3.2超聲波清洗器3.3超速離心機(jī)3.4渦旋混合器3.5濾膜：0.45μ4分析步驟4.1試樣處理：將奶粉樣品混勻，準(zhǔn)確稱取樣品1～5g于50ml比色管中，加入20%甲醇溶液（2.1）約35ml，震蕩混勻，超聲提取5min，加入5%三氯乙酸（2.2）5ml，并用20%甲醇溶液（2.1）定容至刻度，搖勻。以為3000rpm/min時(shí)超速離心5min。取上清液經(jīng)0.45μM濾膜過濾，備用4.2色譜參考條件4.2.1流動(dòng)相：10mmol/L己烷磺酸鈉+10mmol/L檸檬酸∶乙腈=92∶8；4.2.2流速：1.0ml/min；4.2.3柱溫：

4、35℃；4.2.4檢測(cè)器：二極管陣列檢測(cè)器（爸爸）或紫外檢測(cè)器（UV），波長(zhǎng)235nm；4.2.5色譜柱：C18柱子250mm×4.6毫米，5μM；4.2.6進(jìn)樣量：10～20μ4.3色譜分析：進(jìn)樣10～20μL標(biāo)準(zhǔn)使用液及樣品處理液于高效液相色譜儀中，以保留時(shí)間及光譜定性，以樣品峰面積與標(biāo)準(zhǔn)系列比較定量5結(jié)果計(jì)算樣品中三聚氰胺含量按下列公式進(jìn)行計(jì)算。式中：X樣品中三聚氰胺的含量，單位為毫克每千克（毫克/公斤）；C從曲線上查出樣品中三聚氰胺濃度，單位為毫克每升（毫克/升）；V-thetotalvolumeinthesampleisinml(mL);M-samplequal

5、ity,unitisgram(g).6chromatogramFigure1melaminestandardhighperformancechromatogram(1-melamine)Figure2UVabsorptionspectrumofmelaminestandardFig.3liquidchromatographyofmelamineinmilkpowdersamples(1-melamine)Fig.4ultravioletabsorptionspectrumofmelamineinmilkpowdersample7finedensityTheabsolute

6、differencebetweenthetwoindependentmeasurementsobtainedunderrepeatedconditionsshouldnotexceed10%ofthearithmeticmean.8other8.1standardcurveandlinearrangeUndertheaboveexperimentalconditions,thestandardcurvesofmelamineconcentrationwere0.911,9.11,22.8,45.6and91.1mg/Lrespectively.Thestandardcur

7、vewasdrawnbycomparingthepeakareaandtheconcentration:Linearequationsandcorrelationcoefficients:A=81.7c+56.3,r=0.9999Formula:A-peakarea;c-concentration,inunitsofmilligramsperliter(mg/L)8.2methodminimumdetectionlimitTheminimumdetectionlimitofthismethodis5mg/kg,suchasre