奶粉中三聚氰胺含量測定——實驗步驟.doc

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1、高效液相色譜(HPLC-UV)法測定奶粉中三聚氰胺的含量一、實驗?zāi)康模簻y量奶粉中三聚氰胺的含量是否達(dá)標(biāo)。二、儀器：高效液相色譜儀，離心機(jī)，固相萃取裝置，柱溫箱，紫外檢測器，C18柱，超聲波清洗器，pH計，電子天平，氮氣吹干儀，渦旋混合器；5mL移液管1支,1mL刻度移液管1支，25mL容量瓶1個，100mL容量瓶6個，100mL燒杯1個，微量進(jìn)樣器一支。三、試劑：三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)品，1%三氯乙酸，氨水，檸檬酸，庚烷磺酸鈉（色譜純），甲醇（色譜純），乙腈（色譜純），二次水，甲醇水溶液（準(zhǔn)確量取50mL甲醇和50mL水，混合備用），5%氨化甲醇（量取5mL氨

2、水和95mL甲醇混合備用），離子對緩沖溶液（準(zhǔn)確稱取2.10g檸檬酸和2.02g庚烷磺酸鈉加水溶解后調(diào)節(jié)pH=3，定容至1L備用），三聚氰胺儲備液（準(zhǔn)確稱取100mg三聚氰胺，在100mL容量瓶中用甲醇水溶液定容），凈化柱（固相萃取柱，基質(zhì)為苯磺酸化的聚苯乙烯），氮氣。四、實驗步驟：1.樣品預(yù)處理：準(zhǔn)確稱取2g樣品，用10mL1%三氯乙酸溶解后轉(zhuǎn)移至25ml容量瓶中，乙腈定容。超聲提取10分鐘后離心，干過濾。用5mL移液管準(zhǔn)確移取5mL過濾后的溶液過凈化柱，依次用3mL水和3mL甲醇洗滌并抽干后后用約6mL5%氨化甲醇洗脫。洗脫液用氮氣吹干后用1mL

3、流動相定容，渦旋混合1分鐘后經(jīng)0.20μm有機(jī)相濾膜過濾后進(jìn)樣。2.色譜條件：C18色譜柱（150mm×4.6mm，5μm），以離子對緩沖溶液+乙腈（85+15）作為流動相，流量為1.0ml/min，柱溫為35℃，檢測波長為240nm，進(jìn)樣量為20μl。3.標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：將三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)儲備液（1.00×10^3mg/L）用甲醇-水溶液（1+1）逐級稀釋得到濃度為1.00、2.00、4.00、6.00、8.00、10.00mg/L的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液，以峰面積（y）對濃度（x）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。4.回收率實驗：稱取2g樣品，用10mL1%三氯乙酸溶解后轉(zhuǎn)移至2

4、5ml容量瓶中，用5mL刻度移液管準(zhǔn)確移取4.0mL10μg/mL三聚氰胺溶液至容量瓶中，后續(xù)處理與1相同，進(jìn)樣。測量回收率。五、注意事項：1.待測樣液中三聚氰胺的響應(yīng)值應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍內(nèi)，如超過線性范圍，應(yīng)稀釋后再進(jìn)行測定，同時做空白試驗；2.實驗要求調(diào)節(jié)離子對緩沖溶液與乙腈的比例來使pH達(dá)到3.0。